실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
transfer 후에 marker는 사라지고 portein은 확인되는 현상
레벨1 shinhwa (대학원생)
안녕하세요, 대학원 석사 과정 중에 있는 학생입니다.
제목에서처럼 western blot 진행 과정에서 transfer 전에는 marker가 잘 확인 되었고, transfer 후에 gel에는 없지만 membrane에서 marker가 확인되지 않아(정확히는 매우 연하게, 없다싶을 정도로), transfer가 잘 되지 않았다고 판단했습니다.
그래도 혹시 몰라 antibody를 붙여 확인해보았는데, beta-actin 기준 protein 밴드가 뚜렷하게 나타나서...
혹시 transfer 후에 marker는 사라졌으나 protein은 잘 옮겨가는 경우도 있나요?
제가 그 membrane과 똑같은 조건으로 다른 membrane도 동시에 실험 진행 중이었는데, 다른 membrane은 marker가 잘 확인 되었고, protein도 잘 나타났습니다.
transfer buffer는 똑같은 것을 사용했기 때문에 문제가 없다고 생각하고, 한 기기에서 두 개의 transfer tank를 연결했기 때문에 기기의 문제라고 보기도 어렵다고 생각합니다.
전압은 100V, 100분으로 설정하였고, gel 농도는 10%입니다.
사진은 beta-actin이고, marker가 확인 된 것과 안 된 것 입니다.(동시에 진행된 membrane입니다.)
혹시 비슷한 경험과 원인, 조언 주시면 감사하겠습니다ㅜㅜ
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