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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
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질문 나노드랍 측정값과 광학활성 관련해서 궁금한 점 있습니다
알형준팍(대학생)  | 09.20 14:08

PCR을 하기 위해 DNA extraction 이후 나노드랍으로 순도 측정 해봤습니다

 

2번씩 측정했는데 평균값이

260/280 ratio : 1.85   

260/230 ratio : 2.61  

ng/ul : 41.285   

A260=0.826

으로 나왔는데, 여기서 궁금한 점이

 

1. 유기용매는 A230에서 최대 absorbance를 하는 것으로 알고 있는데요. 에탄올 또한 A230에서 최대 흡수를 일으키지 않나요?

맞다면 에탄올이 A230이 아닌 A260 측정값에 영향을 줄 수 있나요?

 

2. 측정값을 보고 제가 내린 결론은 260에서 DNA를 제외한 260nm파장을 흡수하는 오염물질이 제거가 덜 되었고, 또한 A260값은 DNA+x(오염물질)이기 때문에 260/280 ratio의 값도 정상적으로 보이지만 A280에서 단백질이 덜 씻겨내려갔기 때문에 정상적인 값으로 측정되었다고 생각하는데 잘된 추론인지 잘못된 추론인지 궁금합니다..!

#DNA extraction
 
#nanodrop
 
#광학활성
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리안재진  |  09.26 11:10  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

지나가다가...

1. 에탄올 A230에서 흡광에 영향을 줄수 있습니다. 물론 에탄올이 남아 있다면 A260/A230에 영향을 줄수 있습니다. 그래서 컬럼에 로딩하고 Dry 시키는 spin 단계가 있습니다.

2. A260/280 ratio는 일반적인 1.7~2.0 사이의 값으로 적정해 보입니다. 문제는 유기용매 제거 단계의 오염에 있다는 것입니다. 

3. 그리고 측정할때 elution buffer로 영점을 잡았는지도 한번 여쭤보고 싶네요. 

알형준팍  |  10.01 16:28  

안재진님 추가적으로 궁금한게 있어서 답변 드립니다!

 

1. 유기용매 제거 단계에 오염이 있다면 260/230 ratio는 더 낮은 값이 나와야 하지 않나요? 260/230 ratio의 적정값은 2.0~2.2로 알고 있는데 측정한 값은 2.6정도가 나와서요

 

2. 에탄올 또한 A230에서 영향을 주는데 그럼 물질에 에탄올이 남아있다면 260/230 ratio 또한 낮은 값이 나와야 하지 않나요?

 

3. elution buffer로 영점 잡고 나노드랍 측정했습니다!

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