실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Expression/Purification
Transfection 조건
레벨3 냥뮹 (대학원생)
안녕하세요 현재 293T pei transfection 과정 중 고민이 있어 남깁니다. 저는 원래 예전 박사님께 배운대로 Cell을 10cm dish에 3x10^6cells를 깔고 dna 18 ug pei 72 ug (1:4)로 사용중이였는데, 새로운 들어온 선생님께서는 10ug도 많이 쓰는 거라고 하시면서 cell을 2.2x10^6cells(50~60% confluency) 깔고 dna:pei=1:3을 쓰신다고 하더라구요.. 교수님은 둘 중 맞는 조건을 쓰라고 하시는데 전자는 선생님 말씀대로 dna도 cell양도 너무 많은 것 같고 후자 조건을 참고하여 2.5x10^6 cells dna 7 ug 으로 사용중인데도 cell이 좀 많이 죽거나 48시간 transfection 후에도 50~70퍼 confluency밖에 안되더라구요.. Gfp나 형광으로 transfection 후 형광 현미경으로 확인하려고 하는데, 교수님께서 저희가 사용하는 현미경 카메라 감도가 너무 좋아서 의미가 없다고 하시더라구요.. 혹시 다들 transfection 조건 어떻게 하시는지 알 수 있을까요ㅜㅠ? 참고로 media change는 오히려 cell이 washing 중 쓸려나가는 것이 더 안좋을 것 같고 293T pei transfection 상에서는 체인지 안해도 괜찮다는 의견이 많아 진행하지 않고 있습니다..!
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