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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
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질문 E.coli K-12 MG1655에 사용 가능한 플라스미드 서칭..
알joceanil(대학원생)  | 09.26 18:22

안녕하세요, 

 

E. coli K-12 MG1655에 돌연변이 단백질 서열을 과발현 시키는 실험을 하고 있습니다. 

 

플라스미드에 서열을 삽입하여 inducible 한 형태로 만들어야 하는데, MG1655에 적합한 expression vector를 찾는 게 쉽지 않네요... 

primer 종류, ori 종류 등을 다양하게 고려해서 찾아보았습니다만 적절한 발현 벡터를 못 찾았습니다. addgene에서 expression vector라고 소개하는 것들은 전부 다른 strain에서 사용 가능한 것 같이 보이고.. 사실 vector에 대한 설명을 읽어보아도 어떤 용도로 사용할 수 있는지, 왜 vector 내에 그러한 구성을 가지는 지에 대해 알기가 힘드네요  ㅜㅜ.. 

이런 실험 설계 시 플라스미드 선정/혹은 제작을 할 때, 어떤 방식으로 서칭을 하는 게 좋을 지 팁을 좀 알 수 있을까요? 

#합성생물학
 
#플라스미드
 
#과발현
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  09.27 14:17  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- 이균주의 genotype을 보면 F- lambda- ilvG- rfb-50 rph-1로 특별히 요구되는 vector가 있지는 않습니다.

 

 

 

 

 

알synthetic  |  09.28 18:51  

SPEED님, 답변 정말 감사합니다. 

질문 올린 이후로 서칭을 하며 일부 궁금증이 해소는 되었습니다.  

현재 생각으론, E.coli 전용 expression vector 선정 시 가장 먼저 고려해야 할 요소는 Promoter를 무엇을 쓸 것이냐 같다고 보는데요(ori는 대부분 ColE1이기 때문에 배제). 

문제는 현재 MG1655에서 T7 promoter는 사용 불가능, 나머지 Arabinose나 Rhamnose로 induction을 하는 promoter 종류는 이들을 분해하는 유전자가 MG1655에 보존이 되어 있기 때문에 induction molecule로 사용이 부적합하다는 생각이 듭니다. 

다른 Promoter 종류를 다방면으로 찾아보고는 있습니다만, 균의 gDNA를 건드리지 않으면서 이 문제 해결할 수 있는 방안이 있을까 싶네요.. 

 

다시 한번 답변 정말 감사드립니다. 열심히 공부해볼게요. 

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