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질문 cas9으로 knock down 시키는데 잘 안되네요 ㅠ
올챙이땅콩(과기인)  | 09.30 15:51

 

도와주세요 ㅠ 

 

제가 타켓으로 하는 단백질의 siRNA를 회사별로 구매해서 사용했으나, 

전혀 단백질 감소가 나타나지 않았습니다. 

(siRNA 초보는 아닙니다;;)

 

그래서 결국 crisPR-cas9 을 이용해서 특정단백질 다운을 시도했습니다 

(cas9은 처음입니다만..)

벡터형태라 puromycin으로 cell selection 했구요 

처음엔 단백질이 다운되길래 신나했는데 

그 이후 다시 회복이 됩니다 ㅠ

계속 puromycin은 처리 하면서 키웠는데도요 ㅠㅠ

 

이래보신적 있나요? 

PCR 로는 확실히 다운이 되는데..... 

단백질은 ㅠㅠㅠㅠㅠㅠ 왜 다시 올라온걸까요? ㅠㅠㅠㅠ

 

결국 교수님이 

웨스턴의 문제 아니냐 , 제 손 탓을 하시기 시작해서 ㅠㅠㅠ

(제 손이 문제였다면 다른 단백질확인도 잘 안되야 하는데 

다른 단백질은 일절 문제가 없거든요 ㅠ)

 

제가 뭘 놓치고 있는걸까요 

cas9 시스템으로는 넉다운된 stable cell line을 구축할 수 없는건가요? 

 

#cas9
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