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질문 돌연변이 유도 실험관련 조언 부탁드립니다
알IGF(대학원생)  | 2022.09.30 20:13

Zebrafish( Danio rerio)에 있어서 돌연변이 유도 화학물질이라고 생각되는 물질 "X"를 zebrafish에 처리해서 돌연변이를 유도시킬 계획입니다. 실험계획을 짜고있는데 돌연변이 실험 관련해서 조언을 구할 수 있는 곳이 없어 부득이하게 BRIC 고수분들께 질문올립니다.

 

실험계획

1. gDNA extraction by finclip (물질 "X" 처리 전) =a

 

2. 물질 "X" 처리, (Control group은 미처리)

 

3. gDNA extraction by finclip (물질 "X" 처리 후) =b

 

4. a, b + 선별된 target gene 1,2,3,4,5 primer + SYBR Green mix  realtimePCR->melting curve 확인

 

5. a, b 에서 같은 target gene의 melting curve가 달라졌다면 돌연변이 유도가 일어났다고 판단 (Control group이 달라졌을 경우 troubleshooting 후 재실험)

 

과정중에 어떤 부분이 미흡한지 지적 부탁드립니다. 추가적으로 더 나은 실험법이 있다면 공유부탁드립니다!

#mutagenesis
 
#zebrafish
 
#realtimePCR
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