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BioLab 박소정 교수
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 전체 > Molecular Biology-DNA > PCR/RT-PCR/Q-PCR
조회 610  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Real-time PCR 실험 process를 짜봤는데 많이 이상한가요
개구리Crucial(대학생)  | 09.30 23:50

Cell에서 RNA 추출 후 cDNA합성하여 template로 사용하려고 합니다.

Housekeeping gene으로 GAPDH를 사용하고 샘플들 간의 gene A(예시)

발현량 차이를 Real time PCR로 비교하려고 합니다.

먼저 GAPDH와 gene A의 STD curve를 그려서 R^2=0.99 이상에서 

Eff%가 90~110% 안으로 들어오는지 확인합니다.

그리고 Melt Curve에서 sharp하게 하나의 peak만 뜨면 일단 primer에는

문제가 없다고 보고, 

샘플들 간의 gene A 발현량 비교를 위한 본 실험에 들어가려고 합니다.

교수님께서는 굳이 STD curve 그리지 말고 그냥 바로 본 실험 하라고

하시는데, primer 디자인이나 STD의 dilution factor 등 다른 요인은 빼고

위 과정 자체만 봤을 때 이상하거나 부족한 부분이 있을까요?

#Real-Time
 
#PCR
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개구리차몬드  |  10.02 14:35  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

제가 하는 방법이랑 달라서 얘기하신 방법을 잘 모르겠는데

저는 cycle 돌리고 거기의 ddCt 값으로 비교합니다

이걸 %로 나타내서 결과 냅니다

개구리Crucial  |  10.03 00:29  

저도 최종 결과는 ddCt값 보고 비교해서 그래프로 나타내거나 하는데

최종 결과를 내기 위한 실험을 하기 전에

primer의 PCR 효율을 알아보기 위해 STD를 해야하는지 궁금한 것입니다.

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