실험 Q&A Cell Biology > Transfection
lentiviral shRNA transduction실험에서 scramble에서도 knock down되는 것 처럼 보일 때ㅜㅜ
레벨2 밤이 (대학생)
안녕하세요.. 이문제로 몇달째 골머리를 앓고있는 대학원생 입니다.
본론부터 말씀드리자면
Scramble 서열이 들어간 shRNA와 MD2G, psPAX2로 293T에 transfection하여 얻은 lentivirus로 cell에 infection을 2번에 걸쳐 진행하였습니다. 그런데 Western blot을 진행하였을 때 항상 scramble과 shRNA 모두에서 x gene의 단백질 발현량이 현저히 줄어든다는 것입니다..
No infection, Scramble, X gene shRNA 순 입니다.
그러나 vector문제로는 보기 어려운 것이 다른 cell lin서 실험을 진행하였을 때에는 정상적으로 knock down이 진행이 됩니다..
scramble vector문제가 아니라면 virus transduction 자체가 이 유전자의 단백질 발현에 영향을 미쳤고 결과적으로는 knock down도 되지 않았다고 판단해야 할까요?
혹시 이런 경험을 해보신적이 있는 분들께 조언을 요청드립니다ㅠㅠ
감사합니다
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