실험 Q&A Cell Biology > Cell lysis/Apoptosis
Ros detection 질문입니다
레벨1 Jdjdidde (대학생)
Kit를 사용하여 fluorescence 측정을 하였습니다. 씨딩->dcfda 처리 45min->제거후 샘플처리-> 바로 측정 (시간간격) Ros는 빨리 생성되었다 사라지는걸로 알고 있는데, 물질 처리 후 5분 내외의 측정값을 ros 양이라고 믿어도 될까요? <<물질 처리 5분후: H2O2 처리군 ros 증가 & (효과를 보고자 하는) 샘플군 감소 30분후: H2O2 처리군 & 샘플군 모두 증가 2시간, 4시간후: H2O2 처리군 & 샘플군 모두 무처리군과 비슷하게 감소>> 즉 물질처리 직후가 아니면 ros가 sample군에서도 전부 증가하였다가, 일정시간이 지나면 처음 수준으로 회복하는 것 같습니다 Protocol은 물질을 1-6시간 처리하라는데, 그럼 제 샘플은 detection 효과가 없다고 봐야하는건가요? 제 샘플을 24h 처리했을때 viability를 높이는 결과를 바탕으로 ros scavenging을 확인하고자 합니다 1. 기존 조건인 24h에서는 mtt상 죽는 셀이 많은데 실험이 의미가 있을지? (게다가 dcfda가 긴시간에서는 불안정하여 프로토콜이 다릅니다) 2. 만약 24h에서 봐야한다면, 셀수를 보정해주어야 하는건지 3. 10분만 지나도 값이 크게 다른데, 위처럼 처리 5분 후의 값을 유의미하게 볼수 있는지 도움 부탁드립니다 ㅠㅠ
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