아래 질문을 하고 low copy일 수도 있다고 했는데,
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Plasmid를 midi prep (preparation)을 하게 되면 일반 vector의 경우 400-600 ug/mL 농도가 나와서 Cell Transfection 할 때에 잘 사용하고 있어요.
그런데 사이즈가 큰 lentiviral vector (0.8~12kb)가 들어간 E.coli에서 plasmid를 prep 할 때에,
Elution 용액을 70도로 데워서 elution을 해도 30~100 ug/mL 농도가 나와요.
가~~~~끔 농도가 높게 나오기도 하는데, 이게 case by case 같이 유독 그 vector가 농도가 들쭉날쭉해서,
혹시 lentiviral vector plasmid prep 할 떄에 주의사항이나, 방법적으로 알고 있어야 하는 것이 있는지 궁금합니다.
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판매사에서는 high copy라고 하지만, 해당 브랜드에서 구매한 것이
대다수 뽑힐 때에 문제가 있는 것으로 보아,
copy수가 높지 않다고 가정하고,
혹시 plasmid가 low copy일 때는 plasmid prep 과정에서
high copy보다 키우는 양을 대략 몇 배 준비해야 할까요?
보통 midi prep 에서는 전날 50 mL media 에 seed culture 해서
37 도에서 over night으로 키웠어요. 양을 4~5배 늘리면 될까요?
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