실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > Purification/Isolation
RNA puri 후 전기영동에서 RNA가 안보입니다
레벨1 촉발 (대학원생)
프로토콜대로 했는데 전기영동에서 RNA가 안보이네요 실험과정은 이렇습니다 2.5 x 105로 24well plate에 seeding한 뒤 3일 뒤에 cell pellet을 harvest 하였습니다 Q사와 A사의 Total RNA 키트를 사용하였고 모든 작업은 ice box에서 이뤄졌습니다 Lysis buffer 350ul 와 b-mercaptoethanol 3.5ul를 넣고 세포를 완전히 용해시킨 후 두번의 wash 과정을 거치고 중간 과정에서 DNase I 처리 과정이 있어서 각 컬럼마다 N사의 DNase I 를 넣어서 DNase I (RNase free) (1unit) 1ul 10x reaction buffer 10ul 3DW(nuclease free water) 89ul 총 100ul로 37도 인큐베이터에 10분간 반응시켰습니다 그 후로는 프로토콜의 wash 과정에 따랐고 RNase free water로 50ul로 elution 하였습니다 DNase 처리를 하였음에도 전기영동에서 gDNA contamination이 일어난 이유와 2개의 밴드로 나뉘어 보여야 될 RNA가 왜 안보이는지 모르겠습니다 2% agarose gel에서 실시했구요 어떻게 해야 될까요 도움 부탁드립니다
Bio마켓 프리미엄