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질문 PFU 측정 double layer agar 방법에서 top agar 상태가 이상합니다. 조언부탁드립니다.
알Eer(과기인)  | 2022.11.16 10:18

안녕하세요. 이제 갓 바이러스를 시작한 연구자입니다. 박테리오파지 MS2를 이용하는 본 실험에 들어가기 전 연습삼아 titer 측정을 하고 있는데 처음 titer 측정법을 배우며 실험했을때는 soft agar가 매끄럽게 굳고 plaque 형성도 잘 되었는데,

몇 주 후에 다시 배운 방법 그대로 연습을 시작하니 첨부한 사진처럼 soft agar 층이 매끄럽게 형성되지도 않고, control에서 plaque가 형성되지도 않고 soft agar 자체가 오돌토돌하거나 덩어리진 느낌이 있습니다. 처음엔 실수가 있었겠지 하고 다시 해봤는데 두 번째에도 이러니 답답하네요.. 

저희 랩에서는 LB (2.5g/100mL) + agar (1.3g/100mL)로 soft agar를 만들고 시험관에 나눠 50도 워터배스에 보관하다 사용하고 있습니다.

제가 생각하기에는

처음 배울때보다 몇 주가 지난 상태라 실내 온도가 많이 떨어져 있어 soft agar를 나눠 시험관에 분주할때나 워터배스에서 꺼낼 때 금방 식어버려 눈에는 멀쩡해보이지만 꺼내는 순간 이미 응고가 진행되고 있어 뭉치는건가 싶은데.. 제생각일 뿐이고ㅠㅠ

경험많으신 분들의 조언 부탁드립니다.

아 그리고 혹시 soft agar가 엉성하게 굳어도 plaque는 잘 생기나요..? 그렇다면 파지와 호스트 cell의 상태도 확인해야할 것 같습니다. 

감사합니다.

upload_image

#박테리오파지
 
#더블레이어
 
#agar
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  2022.11.16   

제가 보기에 top agar에 대장균을 너무 많이 넣어서 그런것 같아요.

사진을 보면 이미 top agar가 뿌옇게 보일 정도로 대장균이 많아요.

처음 top agar를 부으면 투명하게 보여야 정상입니다. 그만큼 대장균의 농도가 작은 상태에서 대장균이 자라면서 플라크가 생깁니다.

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