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질문에 오류가 있습니다.
0.8 x 10^6 cell을 seeding했는데
어떻게 계산하면 27.5 x 10^6 cell이 되나요
농도와 세포 수를 구분하여 질문해주세요.
200ul : 10ml 을 약분(?)하면 dilution factor이고
더블링 개념은 말씀하신 내용이 맞습니다.
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antmsakf
(비회원)
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22.11.18 15:19
4칸이라는게 hemocytometer 16칸짜리로 이루어진 4구역을 세셨다는 거겠죠?
일단 550개면 너무 많습니다. 다음에는 더 희석해서 세시는 편이 눈과 손이 덜 아플것 같고요.
트리판블루 1:1로 염색하셨다고 가정하면 님이 카운팅하신 시료에는
275*10^4 /ml 즉 2.75*10^6/ml이 있는 겁니다. 계산을 10배 만큼 잘못하셨네요.
그리고 27T flask라는 건 없고 아마 25T flask인것 같은데요.
여기다가 0.8을 깔고 싶으시면 나누기하셔서 약 290ul만큼 넣어주시면 됩니다.
30ul를 넣으시면 0.8*10^5로 까신거라 너무 적어요.
그리고 만약에 30ul를 넣어야 했다고 하더라도 30ul를 따는 것보다 단계적으로 희석해서 더 많은 볼륨을 넣어주는게 오차가 더 적습니다. 예를 들어서 원래 카운팅했던 시료를 1/10으로 먼저 희석하고 희석된 거에서 30대신 300을 넣어 준다던지 이런식으로요.
100mm dish에 200ul을 첨가하셨으면 5.5*10^5을 seeding하신 겁니다.
역시 100mm dish에 넣기에는 너무 적은 양이고 몇대 몇인지는 처음에 님이 카운팅하셨던 시료의 총 볼륨이 얼마인지에 따라 달라지겠네요.
예를 들어서 처음에 만약에 2.75*10^6짜리 시료가 10ml 있었다면 1/50으로 희석하신 겁니다.
doubling이 48시간이라는 거는 셀 하나가 분열해서 2개가 되는데 48시간이 걸린다는 뜻이고, 그 말은 님이 0.8*10^6을 깔아주고 나서 최소 48시간이 지나야 1.6*10^6이 된다는 말입니다.