[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
써모피셔사이언티픽
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
전체보기 안전점검 LABox
 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
조회 914  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 단백질 전기영동 밴드 끌림 현상 관련 질문드립니다.
알ㅎㅎㅎㅎㅎㅎㅎㅎ(대학원생)  | 11.21 14:39

안녕하세요 

단백질 전기영동 실험을 진행하고 있는데, 

계속 밴드 끌림 현상이 생기고 있고 ㅠㅠ 여러 troubleshooting을 진행해보았으나 소용이 없어서 western blot 고수님들의 조언을 구하고자 합니다. 

 

실험 조건은 다음과 같습니다. 

1. C57BL/6 마우스 대장 조직 homogenate(상등액)

2. lane당 단백질 20 ug 

3. Homogenate 샘플을 SDS loading buffer와 섞은 후 100도에서 15분 가열 

4. lane당 샘플 10 ul씩 로딩 

5. 전기영동 조건 200 V, 35분 

6. Gel: bio-rad  Mini-PROTEAN TGX gels (10%) 

 

Running buffer도 늘 새로 만들어서 충분한 양을 넣어서 실험하고 있고, 

Gel 밑의 테이프도 잘 떼어서 사용하고 있습니다. 

 

사진도 첨부하였으니 

조건과 결과에서 제가 혹시 놓치고 있는 부분이 있는지 코멘트해주시면 정말 감사하겠습니다!! 

upload_image

#전기영동
 
#Western blot
 
#단백질
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이CBD 김선우  |  11.21 14:49  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

sample buffer를 넣고 heating 하는 과정은 95도 5분이면 충분합니다. 15분은 좀 과하지 않을까 싶네요.

대왕개구리SPEED  |  11.21 15:44  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- BPB line을 보면 sample or gel 상태가 좋지는 않습니다.

 

- 전기영동 속도를 조금 줄이세요.

개구리차몬드  |  11.21 15:45  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

저는 90도에서 15분 끓이고 있습니다

그런데 loading 전압이 너무 높아요...!!!

저는 running gel은 120V~180V로 하고 있어요

200V까지도 하긴 한다는데 좀 높은거 같아요

전압이 높을수록 smile band가 많이 생기더라구요

알ㅎㅎㅎㅎㅎㅎㅎㅎ  |  11.21 17:29  

네 답변주신 분들 모두 정말 감사합니다 ㅠㅠ 

조언해주신 내용들 참고하여 troubleshooting 다시 해보겠습니다.  

 

감사합니다!! 

뒷다리필1  |  11.22 09:23  

다른것보다.

샘플 만들때 잘못 만들어짐.

버퍼 피에치가 안받거나. 

 

 

헤우니  |  11.25 18:05   

1. sample 만드실때 centrifuge 돌린후 pellet(cell찌꺼기) 이 딸려들어가서 일수 있어요

2.gel 만드실때 stacking gel 부분이 너무 짧아서일수도 있어요.

3.200V는 너무 쌘거같아요. 저희 실험실기준 stacking gel 90v (약 30분) marker가 나눠지기 시작하면 130v 1h 합니다.  너무 쌔면 잘 안나뉘어 질수도 있어요.

답변하기
할인행사/신제품신기술 광고 검색광고
사이젠 사이젠
[Cyagen 슈퍼할인] KO마우스 무료 증정/녹아웃 카탈로그 모델 $2950 이상 할인 (12.31까지)
몰레큘러디바이시스코리아 몰레큘러디바이시스코리아
플레이트리더기 최대 40% 할인 (12.26까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
Celvivo Demo모집! Request Form작성 후 신청시 80만원 상당 Celvivo Start K.. (12.28까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
스트레스없이 3D 세포를 배양해보세요!!
마크로텍 마크로텍
마크로텍 현미경 보유분 연말 특가판매~!! (12.30까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
Azure Trade In Event!최대 40%할인 (12.31까지)
최근등록   더보기 >
시약 구매   12.06
조직 특이적 프로모터 관련 질문   12.06
EZ-Pure™ Plasmid Prep Kit. Ver. 2, EZ-Pure™ Gel E...   12.06
MTT assay에서 IC50값 차이   12.05
FAM probe 형광 발현 문제,,,,   12.05
주화세포에 바이러스 접종시   12.05
Cell seeding시 media   12.05
Ribogreen assay 정확한 원리를 알고싶습니다.   12.05
stable cell line 만들때   12.05
skeletal muscle cross section area 측정방법   12.05
최근답변자 우수답변자
알mindfields

올챙이똑똑해지자

개구리Marine

알yjeu

개구리오이가싫어

개구리안녕난세포야

뒷다리실험은안될때가더많아

알청포도맛 망고

꽃개구리Jake

개구리secu

개구리빛초롱

개구리Q.E.D.

개구리flu...

개구리하늘을달려라

개구리Marine

개구리현직백수

실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
필코리아테크놀로지 광고