비슷한 경험을 한적이 있습니다.
10% APS 냉동해서 사용하고 있나요 냉장해서 사용하고 있나요?
제작 후 보관기간은요?
10%가 안정성이 떨어져서 갑자기 망가지는 경우가 있습니다.
10% APS 다시 제작해서 분주하여 냉동보관 해놓고 사용해 보세요
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레벨2
ckk
(대학원생)
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22.11.25 11:02
10% APS 5ml를 젤 8~10개 만들 분량 정도로 소분하여 -80도에서 냉동하여 사용하고 있습니다.
한번 제작하면 3달 정도 사용하는 것 같은데 APS 새로 만들어서 사용해보겠습니다. 감사합니다
혹시 upper buffer를 충분히 넣었는지 확인해 보세요.
- APS가 문제가 있으면 gel이 안만들어지기 때문에 이유가 아닙니다.
- 전기영동 조건이 어떻게 되나요?
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레벨2
ckk
(대학원생)
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22.11.25 12:06
-강시님
upper buffer 웰 덮도록 충분히 넣었고, 가끔씩 전기영동 중 버퍼가 새길래 탱크에도 버퍼를 많이 부어 셀 자체가 웰 위쪽으로 잠기게 했습니다. (셀은 잠기고 두 전극은 안 잠기는 선에서)
-SPEED님
155V, 75분 러닝합니다.
버퍼는 Tris-glycine 에요
- upper buffer가 모자라면 연속적으로 휘어지지 않고 불규칙 적으로 wave가 생기기 때문에 buffer 문제도 아닐겁니다.
- sample과 gel문제 중의 하나로 보이기 때문에 우선 sample 문제를 확인해 보는 것이 빠를것 같습니다.
- 1) 동일한 gel에서 1, 3, 6, 9, 12, 15lane에 BAS가 있으면 1ug/5ul로
loading해 보세요.
- 잘 내려가면 gel문제입니다.
- 2) BSA로 해서도 동일하게 곡선으로 내려가면 100V로 내려 보세요.
- 잘 내려가면 100V 이하로 실험해야 합니다.
- 3) 100V 이하로 해서도 곡선으로 내려가면 전기영동 upper tank의 백금선 문제입니다.
1, 젤 제대로 안들어짐.
2. 런닝버퍼 충분하지 않아서 그럼. 이럴때는 끝까지 채우세요.
gel이 electrode assembly에 잘 조립되지 않아 안에
있는 버퍼가 샜을 수 있습니다 그러면 전압이 제대로 안 걸려 lane 마다 내려가는 속도가 달라 휘기도 합니다
assembly 조립 후 안에 부터 buffer를 부어서 안에 끝까지 다 붓고 밖에 마저 채우면 됩니다
혹시나 안에 버퍼가 샌다면 중간중간 전압을 멈추고 밖에서 안으로 버퍼를 보충해주면 됩니다
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레벨2
ckk
(대학원생)
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23.01.04 11:05
답변주신분들 감사합니다.
찾는데 오래걸렸지만 원인은 젤도, APS도, 러닝버퍼도, 샘플버퍼도, 전압도 아니였습니다
모든걸 새로 제작하고 전압도 100V 아래로 했지만 그 정도만 덜할 뿐 동일하게 휘길래 뭐가 문제인가 했더니 젤을 끼우는 어셈블리가 문제였네요...
백금선이 멀쩡해 보이긴 했는데 다른걸로 바꾸고 4번 정도 내려봤는데 4번 다 멀쩡하니 어셈블리 문제가 맞아보입니다