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 전체 > Molecular Biology-Protein > Pull-down Assays
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질문 안녕하세요 Lowry method의 보완법을 고안하던 중 질문 드립니다.
알점보아몬드(대학생)  | 2022.11.27 15:51

안녕하세요. lowry assay를 진행 후 궁금한 점이 있어 질문드립니다.

 

제가 찾아본 바로는 bradford assay의 경우 낮은 pH에서 단백질을 펼쳐 정확한 흡광도를 얻으려 한다 확인했습니다.

 

그럼 Lowry assay를 진행할 때 단백질에 SDS를 활용하여 단백질을 펼친다면 더 정확한 결과가 나오는지 궁금하여 질문 남깁니다!

추가로 SDS-page를 보면 95~100도로 가열하는데,

만약 위의 방법을 쓴다면 가열하지 않고도 SDS를 이용해 단백질을 필 수 있는지, 또 가열을 하게 된다면 단백질 정량에 문제가 없는지 알고 싶습니다. 

답변 주셔서 감사합니다.

#lowry
 
#단백질
 
#SDS
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리안재진  |  2022.11.28   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

단백질 정량은 상대적 정량입니다. 

standard 를 어떤 단백질로 하느냐에 따라서 내 단백질의 농도는 다르게 계산될수 있습니다.

다른말로 하면 BSA로 standard를 잡거나 IgG로 standard로 잡거나 혹은 또 다른 단백질로 strandard를 잡는다면, 상대적으로 내 단백질의 농도는 달라질수 있습니다.

결국 내 sample을 지지고 볶아도 결국은 stadard 단백질에 비교값으로 정량을 하기 때문에 단백질을 푼다고 더 높게 나오고, 3차 구조가 되어 있다고 더 낮게 나오지 않습니다.

일반적으로 실험하듯이 메뉴엘 혹은 프로토콜에 있는 방법으로 하시면 됩니다.

알점보아몬드  |  2022.11.28   

상세한 답변 감사드립니다.

BSA sample을 SDS로 펴서 측정한 결과를

이용해 standard curve를 그릴 생각이었습니다.

단백질 농도를 알고 있는 시료에 BSA curve를 그릴 때 했던 것과 같이

시료에도 SDS로 펴준 후 Lowry assay를 진행한다면 

시료의 흡광도를 curve 에 대입 했을 때

원래 시료의 농도와 정량법을 통해 구한 농도의 차이가 줄지 않을까

생각해봤습니다. 

혹시 괜찮으시다면

Lowry assay를 진행할 때 보완할 수 있는 방안에 대한 고견 여쭤보고자 합니다!

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