일반적인 SDS-PAGE gel에는 SDS가 들어가기 때문에

non-reducing sample buffer로 sampling하더라도

gel loading 과정에서 denaturation 됩니다.

native condition의 protein이

gel loading 과정에서 denaturation된다면

끌림 현상이 설명이 될 것 같습니다.

non-reducing 조건으로 내리는 gel도 판매하니 그 방식으로 내리시고 비교해보셔야 할 듯 합니다. 

- non-reducing 조건은 100% native 조건이 아닙니다.

- non-reducing 조건은 SDS-PAGE에서 환원제를 제거하여 확인하는 것이므로 

gel은 아무런 상관이 없습니다.

- non-reducing sample은 어떻게 준비했나요?

일반적인 protein sample buffer(5X, commercial product)를 사용하고 있습니다.

Reducing sample에는 beta-mercaptoethanol이 포함되어 있고,

non-reducing sample에는 beta-mercaptoethanol을 포함시키지 않고 loading 하였습니다.

Positive control이 있고, positive control은 reducing or non-reducing 모두 잘 나오고 있습니다.

크게 다른 점은 positive control은 다른 균에서 만들었고, 현재는 새로운 균에서 같다고 생각되는 단백질을 추출/정제하고 있는데 non-reducing 샘플에서만 끌림 현상(특히, 100 kDa 위쪽으로 더 끌려 보입니다)이 관찰되고, column work으로 인한 salt 문제인가 생각하여 dialysis를 해 보아도 같은 현상이 반복되고 있습니다.