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BioLab 장재봉 교수
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 전체 > Molecular Biology-DNA > DNA Modification
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질문 antibiotics gene genome inserted 균주와 plasmid harboring 균주의 분리
알애오애오애애오(대학원생)  | 2022.12.01 21:26

안녕하세요 E. coli LB sub-culture 에 대해서 질문이 있습니다

두가지 균주가 혼합된 스톡을 분리하려고 합니다

1. 항생제 저항성 유전자(cmR)가 plasmid (정확히 phage origin)로 존재하는 균주 

2. 항생제저항성 유전자가 genome 상에 integration 되어 있고 2번의 plasmid 가 같이 존재하는 균주 

이때 각각 LB와 LCm(LB+chloramphenicol) liquid 배지에서 여러번 dilution 해서 키워봤으나 항생제 저항성유전자가 integration 된 균주는 growth가 느리기 때문에 

LB dilution 시 1번의 균주에서 plasmid 가 빠진 wild type 균주가 분리되고

LCm dilution 시 1번균주가 분리되는 현상이 일어납니다

또한, phage origin 이기 때문에 single colony 가 단일 genotype 이라고 단정지을 수 없는 문제가 있습니다

 

LB 와 LCm 을 번갈아 가면서 키우면 효과가 있을가요?

아니면 다른 효과적인 방법이 있다면 알려주시면 감사하겠습니다

 

#E.coli
 
#phage
 
#genome integration
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2022.12.02   

- 단순히 분리하는 것이 목적이라면 single colony를 분리해서 PCR, plasmid prep.으로 확인하면 됩니다.

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