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BioLab 장재봉 교수
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 전체 > Molecular Biology-DNA > Gene Cloning
조회 918  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 cloning 질문드립니다.
개구리얼마안남았다(대학생)  | 2022.12.05 01:22

안녕하세요 이번에 cloning을 처음하게 되는 학부생입니다.

insert DNA, vector를 얻어야되는것부터 시작하게 되었는데요

insert를 pcr을 통해서 얻은 다음 vector와 제한효소 처리 후 ligase를 통해 합쳐진다는 원리는 알겠습니다.

우선 insert를 얻기 위해 insert가 들어있는 vecotr에서 제한효소로 cut한 다음 PCR을 통해 얻은 다음 cloning하고 싶은 vector에 insert를 넣을때 같은 제한효소를 이용하여 cut한 다음 ligase로 연결 이라고 이해하고 있는데, 그럼 insert를 얻을때와 insert 와 vector 같은 제한효소가 없을때는 어떻게 해야될까요?

또한 유전자를 2개 이어 붙여서 cloning 할때, 그냥 둘 유전자를 이어붙은 primer를 design해주면 되는건지, 각각을 같은 제한효소로 cut한 다음 이어붙여야 하는건지 머릿속이 정리가 안되서 질문드립니다.

#cloning
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
-_-  |  2022.12.05    

대개 insert는 실험자가 디자인해서 집어넣는 서열이니 제한효소 자리를 집어넣은

primer를 써서 cloning한 뒤 해당 vector와 결합할 수 있게 처리합니다.

Phusion같은 걸 써서 몇시간 걸쳐서 제한효소로 자르고 붙일 필요 없는 방법들도 있고요.

두 개 붙이는 경우는 뭐... 여러 가지 방법들이 있으니 한번 검색해보시고요.

저는 따로따로 cloning해서 제한효소 처리한 다음 서로 붙이는 식으로만 해봤지만

그런 방법 외에도 overlapping하는 부분까지 cloning해서 붙이는 것도 있고 그렇습니다.

 

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