안녕하세요 이번에 cloning을 처음하게 되는 학부생입니다.

insert DNA, vector를 얻어야되는것부터 시작하게 되었는데요

insert를 pcr을 통해서 얻은 다음 vector와 제한효소 처리 후 ligase를 통해 합쳐진다는 원리는 알겠습니다.

우선 insert를 얻기 위해 insert가 들어있는 vecotr에서 제한효소로 cut한 다음 PCR을 통해 얻은 다음 cloning하고 싶은 vector에 insert를 넣을때 같은 제한효소를 이용하여 cut한 다음 ligase로 연결 이라고 이해하고 있는데, 그럼 insert를 얻을때와 insert 와 vector 같은 제한효소가 없을때는 어떻게 해야될까요?

또한 유전자를 2개 이어 붙여서 cloning 할때, 그냥 둘 유전자를 이어붙은 primer를 design해주면 되는건지, 각각을 같은 제한효소로 cut한 다음 이어붙여야 하는건지 머릿속이 정리가 안되서 질문드립니다.