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이런 질문 올라올 때마다 적지만, 잘 모르겠으면 키트 매뉴얼이나 프로토콜대로만 따라해도
중간은 가고, 설령 결과가 이상하더래도 제조사나 공급사랑 이야기해볼 건덕지가 생깁니다.
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레벨5
Marine
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22.12.06 14:56
무턱대고 실험 프로토콜대로만 하면 그 실험 원리에 대해서 배우는게 있을까요?
설령 키트를 가지고 실험을 하더라도, 한번 실험을 해보고 프로토콜에서 이런 점을 바꿔보면 어떨까? 의문을 가지는건 당연한 거라고 생각합니다;;
제 경험상 답변을 드리자면,
- 점액질이 많아 lysis버퍼를 넣고 샘플이 뭉치는 경우에 어떻게 해야 할까요? 잘 풀리게 voltexing, tapping을 해도 될까요? 그 후에 RNase를 넣어도 될까요?
상관없습니다 이 단계에서 잘 섞어주셔야 lysis가 잘 되고, 중화가 잘되어 DNA 가 column 에 균일하게 binding 이 잘 될 수 있습니다.
(경우에 따라 pipetting 으로 섞어 주셔도 되는데 이런 경우 gDNA 가 조금 fragmentation 될 수는 있습니다.)
- 프로토콜에는 없지만 마지막 단계에서 AE buffer를 넣기 전에 한번 건조하는 시간이 필요하지 않을까요?
말씀하신대로 마지막에 Air-dry 해주시면 잔여 wash buffer 들을 다 날려 보낼 수 있기 때문에 해주시는 것이 좋습니다. 보통 5-10분정도 상온에서 air-dry 하시면 됩니다.
- 프로토콜 상에는 AE buffer 를 100ml 첨가하라고 되어있는데 50ml를 첨가해도 문제가 없을까요?
상관 없습니다, 시작 샘플의 양이나 본인 샘플의 상태 등에 따라서 마지막 elution buffer 는 유동적으로 조절 해주시면 됩니다. 하지만 column 을 다 적실정도는 되어야 하기 때문에, 보통 최소 30 으로 elution 하고 경우에 따라서 이 elution 과정을 2번에 나누어 할 수도 있습니다.
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레벨1
잘뽑고싶어요
(대학생)
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22.12.06 17:54
감사합니다...
아직 배울점이 많습니다.