[DEBUG-WINDOW 처리영역 보기]
즐겨찾기  |  뉴스레터  |  오늘의 정보 회원가입   로그인
BRIC홈 실험
에이비클로널
배너광고안내
이전
다음
스폰서배너광고 안내  배너1 배너2 배너3 배너4
BioLab 장재봉 교수
전체보기 안전점검 LABox
 전체 > Molecular Biology-DNA > Purification/Isolation
조회 324  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 DNeasy Plant Mini kit 관련
알잘뽑고싶어요(대학생)  | 2022.12.06 13:10

안녕하십니까. 신참 대학원생입니다. 능숙하지 않다보니 실수가 많은것 같습니다. 때문에 간혹 DNA 농도가 낮거나 ratio가 엉망징창인 경우가 있어 Nano Drop 측량이 항상 무섭습니다...

우선 세가지 궁금한점이 있어요.

- 점액질이 많아 lysis버퍼를 넣고 샘플이 뭉치는 경우에 어떻게 해야 할까요? 잘 풀리게 voltexing, tapping을 해도 될까요? 그 후에 RNase를 넣어도 될까요?

- 프로토콜에는 없지만 마지막 단계에서 AE buffer를 넣기 전에 한번 건조하는 시간이 필요하지 않을까요?

- 프로토콜 상에는 AE buffer 를 100ml 첨가하라고 되어있는데 50ml를 첨가해도 문제가 없을까요?

읽어 주셔서 감사합니다.

#식물
 
#DNA
 
#DNeasy
답변하기
답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
-_-  |  2022.12.06    
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

이런 질문 올라올 때마다 적지만, 잘 모르겠으면 키트 매뉴얼이나 프로토콜대로만 따라해도

중간은 가고, 설령 결과가 이상하더래도 제조사나 공급사랑 이야기해볼 건덕지가 생깁니다.

개구리Marine  |  2022.12.06   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

무턱대고 실험 프로토콜대로만 하면 그 실험 원리에 대해서 배우는게 있을까요?
설령 키트를 가지고 실험을 하더라도, 한번 실험을 해보고 프로토콜에서 이런 점을 바꿔보면 어떨까? 의문을 가지는건 당연한 거라고 생각합니다;;

 

제 경험상 답변을 드리자면,

-  점액질이 많아 lysis버퍼를 넣고 샘플이 뭉치는 경우에 어떻게 해야 할까요? 잘 풀리게 voltexing, tapping을 해도 될까요? 그 후에 RNase를 넣어도 될까요?

상관없습니다 이 단계에서 잘 섞어주셔야 lysis가 잘 되고, 중화가 잘되어 DNA 가 column 에 균일하게 binding 이 잘 될 수 있습니다.
(경우에 따라 pipetting 으로 섞어 주셔도 되는데 이런 경우 gDNA 가 조금 fragmentation 될 수는 있습니다.)

 

- 프로토콜에는 없지만 마지막 단계에서 AE buffer를 넣기 전에 한번 건조하는 시간이 필요하지 않을까요?

말씀하신대로 마지막에 Air-dry 해주시면 잔여 wash buffer 들을 다 날려 보낼 수 있기 때문에 해주시는 것이 좋습니다. 보통 5-10분정도 상온에서 air-dry 하시면 됩니다.

 

- 프로토콜 상에는 AE buffer 를 100ml 첨가하라고 되어있는데 50ml를 첨가해도 문제가 없을까요?

상관 없습니다, 시작 샘플의 양이나 본인 샘플의 상태 등에 따라서 마지막 elution buffer 는 유동적으로 조절 해주시면 됩니다. 하지만 column 을 다 적실정도는 되어야 하기 때문에, 보통 최소 30 으로 elution 하고 경우에 따라서 이 elution 과정을 2번에 나누어 할 수도 있습니다. 

알잘뽑고싶어요  |  2022.12.06   

감사합니다...

아직 배울점이 많습니다.

답변하기
할인행사/신제품신기술 광고 검색광고
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN한국공인대리점] TECAN 자동화장비 신년맞이 상담 이벤트 (3.31까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
무중력으로 스트레스 없이 3D 세포 배양 최적화!
그린메이트바이오텍 그린메이트바이오텍
[TECAN 한국공인대리점] TECAN Microplate reader/ IMPLEN Nanophotomet.. (4.11까지)
모아바이오 모아바이오
[AFG Scientific] *새해맞이* 20% 특가 할인 프로모션! 2만가지이상의 모든 ELISA Kit.. (2.28까지)
필코리아테크놀로지 필코리아테크놀로지
효율적인 Genome Editing의 필수조건은?
바이오닉스 바이오닉스
[TECAN No.1 한국공식대리점] TECAN NGS 전처리 자동화 System MagicPrep™ 이벤트 (3.4까지)
최근등록   더보기 >
brain OCT section slide 보관법   02.02
cDNA 합성 전 rna 농도   02.02
transcription factor의 potential 관한 기본적인 질문입니다.   02.01
western antibody   02.01
cDNA 합성 시 gDNA 제거   02.01
세포독성 흡광도   02.01
희석 계산 질문 드립니다.   02.01
methanol에 녹인 ammonium acetate filter paper 종류   02.01
전기 영동 후 gel purification   02.01
혹시 Pipette Washer 하는 바이오 랩이 있으신가요?   02.01
최근답변자 우수답변자
대왕개구리SPEED

개구리AD석사생

개구리AstV

알말하는걈쟈

대왕개구리강시

알지이

알클로나

알Tathion

대왕개구리강시

꽃개구리스카이

꽃개구리발그런

개구리냥냥아빠

개구리겨우살이

꽃개구리Applied_Mi..

꽃개구리juno

개구리미맹

실험관련연재
세오 연재중실전 실험 프로토콜 101
세오 (필명) (Cincinnati Children’s Hospital Medical Center)
곽민준 연재중랩노트
곽민준 (POSTECH 생명과학과)
신코 연재중분석장비 이야기
분석장비 탐험가 (필명) ((주)신코)
박은총 연재마감후배에게 주고 싶은 면역학 노트
박은총(Duke University)
Mr.S 연재마감의학계의 Spectaculum: 임상시험
Mr. S (필명) (연세대학교)
에스프리 연재마감실험을 해봅시다
에스프리 (필명)
이제욱 연재마감생명과학자 기초체력 다지기
이제욱 (오송첨단의료산업진흥재단, 신약개발지원센터)
위로가기
실험 홈  |  실험FAQ
 |  BRIC소개  |  이용안내  |  이용약관  |  개인정보처리방침  |  이메일무단수집거부
Copyright © BRIC. All rights reserved.  |  문의
트위터 트위터    페이스북 페이스북   유튜브 유튜브    RSS서비스 RSS
필코리아테크놀로지 광고