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 전체 > Molecular Biology-DNA > Purification/Isolation
조회 849  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 cDNA 농도가 너무 낮아서 RNA로 transcription 하기 위한 mixture
앞다리medi92(대학원생)  | 2022.12.07 11:51

cDNA을 추출해서 350ul을 확보 했는데요

농도를 쟤니까 37.8ug/ml이 나오더라구요

만들어야할 mixture의 농도는 1ug으로 RNA을 만들려고 하는데요

1ug = 1000ng 

1000/37.8 = 26.45ul인데 mixture kit에서 total volume이 20ul 이거든요...

kit에 있는 각각의 조성도 양이 적어서

어떻게 하는게 나을까요?....ㅠㅠ

#DNA
 
#transcription
 
#mixture
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리BlackSmile  |  2022.12.07   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

1 ug이 아니라 500 ng이나 그 이하로 cDNA 만드는 것을 고려할 수 있습니다.

오미자랩  |  2022.12.15    
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

최근에 takara 의 IVT관련 제품에서 DNA 농도별로 수율을 측정한 결과가 정리된 것을 참조하면 좋을 듯합니다.

Template DNA 는 1 ug 정도는 있어야 충분히 뽑혔던 것으로 기억나는데

total volume 이 20 uL 이 넘더라도 기존 volume 에서의 비율을 계산하여 넣어줘도 RNA 양이 충분히 뽑혔던 것으로 기억납니다. 

무슨 실험을 하시려는지는 모르겠지만 RNA를 만들려는 실험이라 하셔서 우선 제가 아는 in vitro transcription (IVT) 실험을 가지고 예를 들어봤으니 참고 바랍니다.

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