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질문 protein dialysis를 하려고 하는데 제가 하는 방법이 맞는 지 알고 싶습니다
올챙이bio1296(대학원생)  | 2022.12.07 16:48

안녕하세요

protein dialysis를 하려고 하는데 제가 하는 방법이 맞는 지 알고 싶습니다

우선 프로토콜은 

chrome-extension://efaidnbmnnnibpcajpcglclefindmkaj/https://static.igem.org/mediawiki/2019/4/47/T--CSMU_Taiwan--proteindialysis.pdf

를 사용할 계획이구요. 왜냐하면 정제 할때 이미다졸을 많이 사용할 것이기 때문입니다.

그리고 Spectrum™ Labs Spectra/Por™ 7 50,000 D MWCO 표준 RC 전처리 투석 키트를 사용해서 투석을 할 예정인데 이유는 50kD미만의 단백질이 target 단백질이기 때문입니다.

제가 혼자서 실험을 꾸려나가는 거라 아직 부족한 점이 많습니다.

많은 조언 부탁드립니다.
#투석
 
#imidazol
 
#protein dialysis
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리SPEED  |  2022.12.07   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- pore는 분자량 기준으로 정하면 되는데 50Kda 미만 단백질 보다는 몇 Kda 단백질을 기준으로 하세요.

 

- 어떤 목적으로 투석을 하는지 모르겠지만 soluble 단백질이면 최종 buffer로 바로 투석하면 되고 투석외액은 시료의 최소 100배 이상, 24시간 기준으로 최소 4회 이상 투석외액을 교환해주면 됩니다.
올챙이bio1296  |  2022.12.07   

정말 감사합니다!

저는 현재 37kDa와 32kDa 두가지의 단백질을 투석할 예정이구요 목적은 항원 생산입니다
대왕개구리SPEED  |  2022.12.07   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

- 그 정도 분자량이면 5KDa MWC/O를 사용해도 무방합니다.

 

- 시료 부피가 적으면 투석 보다는 UF를 사용한 buffer change가 단백질 loss 측면에서 조금 더 유리합니다.
올챙이bio1296  |  2022.12.07   

감사합니다!

5kDa으로 구매해서 진행해야겠습니다. 

많은 도움 받았습니다. 정말 감사합니다.
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