실험 Q&A Mol. Biol.-Protein > Western Blot
western band가 smear하게 나옵니다.
레벨3 신짜오 (대학원생)
안녕하세요, 벌써 석사 4차 된 대학원생 입니다.
지난 2년동안 대부분 fraction으로 cytoplam과 nucleus를 분리하여 protein을 뽑았었고 RIPA buffer는 거의 안썼었습니다.
쓸 일이 있어도 다른 선배님꺼를 사용했으며 제가 직접 만들어 쓴게 얼마 되지 않은데 추측상 그 이후부터 밴드가 끌려 보이는거 같습니다.
다른 밴드들은 괜찮은데 a-tubulin만 끌려 보입니다.
그래서 정량도 제대로 안돼보이고 교수님 보여드리기 부끄럽습니다ㅠㅠ
protein lysis 과정은 간단하게, cell을 tube에 모으고 RIPA buffer를 양에 맞게 넣고, ice에서 10분 후 14000rpm으로 15분 돌려줍니다.
sonication은 처음에는 했었다가 어느순간부터 안하고있습니다.
아마 sonication을 안했기 때문일까요?
아래는 같은 protien으로 내린 다른 밴드 사진 입니다.
여태 protein 뽑는걸로 고민한적이 없었는데 무엇이 문제일까요ㅠㅠ
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