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언급한 activation의 기준을 단순 cell morphology로 판단하시고 적으신건가요? LPS처리 전후 비교했을때 media에서 IL-6, TNF-a와 같은 cytokines이 control에 비해서 낮게 측정이 된다면 문제는 없고요.
사실상 다른 cell line들과 다르게, 전세계적으로 딱딱 관리가 되지 않고 거의 방치되다 싶이 키워지고 있는 세포가 BV-2 cells입니다. BV-2 cells 처음 만들때에는 RPMI에 키웠는데 지금은 DMEM에 키우고. 사실 연구실마다 가지고 있는 BV-2 cells의 passage number나 cell character가 뭐가 맞는지 아무도 모릅니다. 7년전에 BV-2 cells을 만들었던 사람을 아는 사람에게 이메일로 BV-2 cells에 물어보았는데, 답장받기로 자기들도 BV-2 cells의 character가 microglia와 유사하지 않고 좀 그렇다라는 말도 받았고요.
굳이 조금 개선을 하자면 FBS양을 5%로 낮추어서 키워보세요. FBS농도에 따라 자라는 속도가 너무 차이가 나서 10% FBS로 키울때 media에 영양분이 빨리 고갈되기도 하고 동시에 여러 물질도 media에 빨리 축적되서 microglia morphology가 좀 더 빠르게 둥근 형태를 띄더라고요.
그래도 잘안되면, 아주 소량의 세포(10개 정도)만 2.5~5% FBS 조건에서 다시 불려서 키워보면 좀더 uniform한 형태의 BV-2 cells을 얻을 수 있기는 합니다. 더 좋은건 stock 괜찮은걸 찾아서 풀어보는 거겠죠.
아무튼 여러 방법을 시도 해도 안되면 그냥 포기하거나 그냥 받아들이는 수밖에 없습니다. 그게 BV-2 cells이기 때문이죠.
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레벨5
실험은안될때가더많아
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22.12.07 21:40
위엣분이 너무 잘 대답해주셨네요
첨언하자면 heat inactivated FBS를 이용하시고 계신가요? heat inactivated FBS 사용 중이 아니시라면 사용을 고려해보세요
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레벨3
신짜오
(대학원생)
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22.12.07 22:06
다들 소중한 답변 감사합니다.
activation 되었다고 판단하는 이유는 LPS 처리 후 cell에서 protein을 뽑아 Western 내렸을때, 현재 보는 cytokine이 control에서 너무 높아서입니다ㅠㅠ media에서 측정은 한번도 해본적이 없는데 측정 후 생각해 보겠습니다. 조언 해주신대로 FBS 5%로 바꿔보겠습니다. 감사합니다!
FBS는 항상 heat activation 해서 사용중입니다. 답변 감사합니다!