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비피도박테리움 내산성 내담즙성실험
레벨1 머하지 (일반인)
제가 아직 고등학생이라 이쪽에 많은 지식이 없어서요ㅠ 1. 이런식으로 실험하려고 하는데 문제는 없나요?? 2. 내산성 내담즙성 각각 유산균의 생존률이 얼마정도 나와야 효능이 있다고 판별이 되나요..? 3. 중간에 펩톤으로 희석을 하는과정이 나오는데 펩톤을 쓰는 이유가 뭔가요?? 4. 내산성 실험에서는 유산균을 3시간동안만 위액에서 배양을하는데 내담즙성 실험에서는 담즙액에서 24시간 동안 배양을 하는데 담즙액에서의 배양시간이 더 긴이유 는 뭔가요?? 5. 대조군을 생막걸리에서 분리한 유산균을 사용하는데 생막걸리에서 유산균만을 어떻게 분리시킬수있나요?? 6. 대조군을 사용하는 이유가 뭔가요?? 너무 길어서 죄송합니다ㅠㅠㅠ내일부터 실험시작인데 이 궁금증을 찾아봐도 나오지 않아서요ㅠㅠ꼭 답변해주시면 정말정말 감사할것 같습니다..! ㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡ실험 과정ㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡㅡ 대조군: 생막걸리에서 분리한 유산균 내산성 측정 위내 환경에 대한 생존율을 실험하기 위하여 인공위액을 만들어 생막걸리에서 분리한 유산균을 접종한 후 내산성을 측정한다. 인공위액은 MRS broth에 1 M HCl을 첨가하여 최종 pH를 2.5로 조정한 뒤 가압멸균을 실시한다. 멸균된 MRS broth를 50℃까지 냉각시킨 후 멸균한 pepsin용액을 0.22 ㎛ pore size filter를 이용하여 최종농도가 1000 units/mL이 되도록 배지에 첨가한다. MRS broth에 24시간 계대 배양한 유산균(1×109 CFU/mL)을 내산 배지에 1%(1×108 CFU/mL) 접종하여 37℃에서 0, 3시간동안 배양한다. 배양한 균주는 1 mL(1×107 CFU/mL)씩 0.1% peptone수 9 mL에 접종하여 6배 계열 희석한 후 peptone수에서 각각 100 μL을 취해 MRS agar plate에 접종한다. 37℃에서 48시간 배양 후 생균을 counting한다. 내담즙성 측정 췌장에 만들어져서 십이지장에서 분비되는 담즙액에 대한 생존율을 실험하기 위하여 유산균을 접종한 후 내담즙성을 측정한다. MRS broth에 담즙염인 Oxgall 0.3%(w/v)을 첨가하여 고압멸균을 실시한다. 담즙염 배지에 24시간 계대 배양한 유산균을 내담배지에 접종하여 37℃에서 0, 24시간동안 배양한다. 배양한 균주를 1mL을 6배 희석한 후 각 peptone수에서 각각 100 μL을 취해 MRS agar plate에 접종하여 37℃에서 48시간 배양 후 생균을 counting한다.
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