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 전체 > Molecular Biology-DNA > Transformation
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질문 Transformation가 잘 안 돼요ㅜㅜㅜㅜ
올챙이ggy(대학원생)  | 2022.12.10 00:37
첨부파일 파일첨부: addgene-plasmid-47049-sequence-67071-map.png (171 KB)
이미지 첨부파일
안녕하세요.
실험을 시작한 지 얼마 되지 않은 새내기입니다.
Addgene에서 pJBEI-6410이라는 벡터를 구매했습니다.
벡터를 저장하기 위해 E. coli XL1-blue, DH5a에 transformation을 시도했는데 colony가 나오지 않았습니다.....
Addgene에서 권장하는 DH10B를 사용하지 않아서 그런걸까요?
아니면 방법이 잘못된 것일까요?

T.F 방법은 아래와 같습니다.

1.배양한 cell을 원심분리 후 상층액 제거, 0.1M CaCl2 1ml넣고 파이펫팅으로 살살 풀어주고 튜브의 7ml 선까지 0.1M CaCl2 넣은 후 얼음 속에 40분간 방치
2. 원심분리 후 상층액 제거 후 약간의 0.1M CaCl2넣고 살살 풀어준 후 2ul 플라스미드가 담긴 튜브에 100ul 넣은 후 15분 방치
3. 42도에서 48초 heat shock 후 바로 얼음에 10분 보관
4. LB 배지 100ul 넣고 37도 스탠딩 인큐베이터에서 배양
5. 플레이트에 도말
#Transformation
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리무광  |  2022.12.10   

어렵게 가지말고 competent cell을 구매해서 하시면 젤 쉽고 빠를 겁니다

시간도 금이랍니다.

알카리스마정  |  2022.12.10   

1. 엠피실린 LB 배지에 plating 하셨나요?

 

2. 그렇다면, DH10B 사서 해야할 것 같습니다.

대왕개구리SPEED  |  2022.12.10   
CP cell 만드는 실력도 필요 하고 학위과정에서는 문제점 해결하는 실력을 늘여야 합니다.

잘나오는 결과는 누가 해도 잘 나옵니다.

1. CP cell 검증
크기가 작은 vector가 있으면 사용 해 보세요.

2. heat shock 시간을 90초 까지 늘여 보세요.
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