실험 Q&A Cell Biology > Transfection
S.cerevisiae URA3 k/o에 대해 질문 드립니다.
레벨2 수박고구마 (대학원생)
현재 Cas9과 gRNA를 in vitro에서 RNP형태로 만들어 PEG-mediated transformation으로 S.cerevisiae protoplast에 넣어주는 과정을 실험하고 있는 학생입니다.
Cas9/sgRNA로 URA3를 target해서 실험을 진행하였습니다.
해당 과정을 완료한 뒤 YPD-5-FOA배지에 도포한 후 뜨는 colony만 새 YPD-5-FOA 배지로 옮겼는데 잘 자랐습니다.
YPD-5-FOA
yeast extract 1%
Bacto peptone 2%
50% glucose 2%
Agar 2%
auto 후 5-FOA 1mg/ml
그래서 교차 검증을 위해서 SC-U 배지에서 해당 cell들을 키워봤는데... 똑같이 또 잘 자랍니다..
SC-ura-
a.a-ura 0.77g
N base w/o a.a 3.35g
pH 5.4~5.5
Agar 10g
TDW 470ml
auto 후 glucose 20ml
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Total 500ml
원인을 찾고 싶은데,,, 고수님들께서 도움을 주시면 감사하겠습니다...
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