실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
제한효소 반응
레벨5 pasg1345 (과기인)
안녕하세요
제한 효소 반응을 통한 클로닝 과정에 궁금한 점이 있어 글을 남깁니다.
제가 기존에 두 종류의 enzyme을 사용하였을 때 버퍼 조성이 맞아서 두 enzyme을 동시에 반응을 시켰는데요,
요번에 사용하고자 하는 enzyme들은 동시에 반응 시키지 못해
한번 반응시키고 끝나면 다른 enzyme으로 반응 시켜야 할 것 같습니다.
그럼 이때 한번 enzyme으로 자르고 나서, gel purification을 하고 또 enzyme으로 자르는 것인가요?
아니면 enzyme 반응이 끝난 샘플을 원심분리해서 상층액을 제거한 다음 다른 enzyme(+ buffer)를 넣어 반응시켜주는 것인가요?
제가 생각하기엔 하나의 반응이 끝나면 그 tube안에는 DNA+buffer+DDW로 인해 volume이 많을 것 같은데 아무래도 그 tube에 다시 enzyme과 buffer를 넣어주는 것은 아닐거 같아서 여쭈어봅니다.
답변을 위해 시간 내어주셔서 감사합니다.
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