실험 Q&A Immunology > ELISA
ELISA 고수님들 질문드려요~!!!!
레벨1 뉴로민 (과기인)
ELISA 초보의 질문입니다...
환자에서 자가항체를 검출하기 위해 ELISA를 계획하고 있는데, 발견되지 얼마 안 된 항체라 그런지 제대로 된 kit가 없어서 antigen을 코팅해서 직접 develop할 계획입니다. 근데 중간중간 헷갈리는 스텝이 많아서 도움 요청합니다ㅜ 제가 있는 실험실은 ELISA를 거의 하지 않아서 잘들 모르시네요.
우선 Nunc Maxisorp ELISA plate에다가 1) 자가항체가 타깃하는 항원 (protein)을 coating하고, 2) Blocking 후 환자 혈청을 dilution해서 incubation, 3) Human IgG Fc에 대한 HRP-conjugated 2'를 붙이려 합니다.
이 과정에서 각종 buffer 조성이 고민입니다. 제가 참고하는 논문들은 제각기 다르고 언급이 없는 논문들도 많아서요...
1. Coating buffer: 그냥 PBS에다 해도 되는 것인지, 별도 buffer가 추천되는지요? 제가 찾은 reference들은 절반 이상은 PBS에다 한다고 하고, 0.1M carbonate buffer에 썼다는 논문도 있습니다.
2. Diluent buffer: serum을 dilution하는 용액도 마찬가지로 PBS에다 하는건지, 보편적으로 추천되는 희석 버퍼가 있는지요?
3. Blocking buffer: 논문들에 따라 5% nonfat milk in PBS 혹은 0.5% casein sodium in 0.05% PBS-Tween20을 얘기하는데 어떤 차이점이 있는건가요...?
감사합니다.
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