RAW 264.7 cell로 RANKL 분화를 유도하는 실험을 하고 있는 석사생입니다. Western blot을 하기 위해 cell에서 단백질을 추출하려고 하는데요. 세포가 자꾸 죽습니다.

DAY1-6well plate에 cell seeding(DMEM사용)

DAY2-RANKL처리(a-MEM사용)

DAY4-배지교체(a-MEM사용)

DAY6-Western blot 샘플링

이와 같이 실험을 하고 있습니다.

NC와 treat군 상관없이 세포가 랜덤하게 죽어있어서 원인 파악하기가 어렵네요. 어떤 plate는 seeding한 세포가 다 죽어있을 때도 있고 또 어떤 날은 다 살기도 하구요. 또 다른 날은 몇개는 살아있을 때도 있습니다. 죽는 날짜도 정말 랜덤합니다ㅠ

또 죽는 위치도 가장자리만 죽어있을 때도 있고 가운데만 죽어있을 때도 있습니다

일단 지금까지 해본 것은 모든 배지를 새로 구매하여 사용했고, 클린배치와 인큐베이터 청소도 싹 해보고 cell stock도 새로 만들어서 사용하였습니다.

그래도 문제가 해결되지 않아서 혹시 해결방법을 아시다면 도움 부탁드립니다ㅜㅜ