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질문 ATP bioassay에 관해 질문이 있습니다!!
알aqwasd(대학생)  | 01.21 12:27

안녕하세요 지금 학부 4학년으로 대학원 진학을 앞두고 실험실 학부연구생으로 있습니다.

저희 실험실이 바이러스를 주로 다루고 있어서 ATP bioassay를 처음으로 구축하고자 합니다.

키트는 thermo ATP determination kit(A22066)을 추천받았습니다.

ATP 측정을 위해서는 cell 안으로 luciferin과 luficerase가 들어가거나 cell을 lysis해서 luciferin과 luficerase가 반응을 해야 발광을 측정할 수 있다고 생각이 드는데요. 

현재 제조사의 protocol을 읽어보니 그런 과정에 대한 설명이 없는거 같아 질문드립니다.

kit content)

1. D-luciferin

2. Luciferase: Tris-acetate, ammonium sulfate, glycerol, ethylene glycol

3. Dithiothreitol(DDT)

4. ATP

5. 20X reaction buffer: Tricine buffer, MgSO4, EDTA, sodium azide

 

이렇게 조성이 되어있는데요 혹시 content 중에 cell 용해나 막 유입에 관한 재료가 있는건지 아니면 제가 방법 자체를 잘못 이해하고 있는건지 궁금합니다!

#ATP
 
#luminescence
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
꽃개구리bio  |  01.22 05:08  

세포를 깨서 lysate를 이용해서 측정합니다. 

끊는 물에서 세포를 깨는 방법이 가장 좋아서 저는 이 방법을 사용합니다. 

아래 논문 링크 첨부합니다. 

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/12123672/

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