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 전체 > Molecular Biology-DNA > Sequencing
조회 612  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 sequencing 질문드립니다
개구리분자생물학도(대학생)  | 01.24 18:40
ligation 후 마크로젠에 sequencing 을 맡겨 확인해 볼려고 하는데요.

confirm pcr을 돌려 그 부분을 맡겨서 확인하는 거다 라는 것과 그냥 prep후 맡겨서 확인하는거다 라고 각각 선배들께서 알려주셨는데 차이가 있을까요?
#sequencing
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
123  |  01.24 23:54   

정답은 없습니다.

본인에 맞는 방법을 쓰면 됩니다.

confirm PCR을 하면 negative를 당일 확인할 수 있고

negative sample 의뢰에 따른 sequencing 서비스 비용을 아낄 수 있습니다만

본인이 cloning 숙련자이고

ligation 시 positive 비율이 평균적으로 90% 이상이 된다면

굳이 polymerase 소모할 필요 없이 바로 sequencing 의뢰하면 됩니다.

뒷다리대학원생(진)  |  01.25 11:06  

저도 이번에 ligation했고 마크로젠에 pcr 맡기는데 저는 프랩하고 plasmid로 맡기려구요

개구리분자생물학도  |  01.25 11:53  
confirm pcr 안하고 그냥 prep 하고 맡기신다는거죠?
대왕개구리강시  |  01.26 10:29  

sequencing을 맡기기 위해 plasmid nmikniprep을 했으면 당연히 agarose gel에 vector와 함께 걸어서 cloning이 된 것을 확인한 후에 보내는 것 아닌가요?

애매하면 제한효소로 잘라서 원하는 크기의 조각이 나오는지 확인해야 하구요.

클로닝 확인이 안되었는데 sequencing 보냈다가 vector sequence만 나오면 보스한테 쫑크먹을텐데.....

알작작해생선  |  01.26 16:18  

저도 보통은 prep해서

1. 제한효소로 자르고

2. agarose gel에 로딩해서

3. 사이즈 확인해서 잘 들어갔구나 싶으면

4. 업체에 시퀀싱 보내서 mutation 확인합니다.

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