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질문 rna-seq 분석 HISAT2 에러
알shh_0510(대학원생)  | 01.26 15:05

안녕하세요, 마우스 샘플 1개 테스트를 위해 HISAT2 돌리다가 문제가 생겼습니다.

노트북(Intel(R) Core(TM) i5-10210U CPU @ 1.60GHz   2.11 GHz, 16RAM)에서 버추얼박스를 설치해 우분투에서 돌렸습니다.

아래는 제가 입력한 명령어입니다.

hisat2 -p 4 --rna-strandness RF -x ./2.Input/GRCm39 -1 
./2.Input/LA50-3-CO_1_paired.fastq -2 
./2.Input/LA50-3-CO_2_paired.fastq 2> 
./3.Output/LA50-3-CO_log| samtools view -@ 8 -Sbo ./3.Output/LA50-3-CO.bam

실행 1~2초후, 끝나는 느낌이고 실행로그를 살펴보면 아래와 같이 적혀있습니다.

Warning: the current version of HISAT2 (2.2.1) is older than 
         the version (2.127.0) used to build the index.
         Users are strongly recommended to update HISAT2 to the latest version.
Out of memory allocating plen[] in Ebwt::read() at gfm.h:6069
Error: Encountered exception: 'std::bad_alloc'
Command: /home/shkim/apps/hisat2-2.2.1/hisat2-align-s --wrapper basic-0 
-p 4 --rna-strandness RF -x ./2.Input/GRCm39 --read-lengths 
101,97,99,98,95,93,92,90,96,94,81,91,89,88,84,83,79,75,87,82,78,76,72,70 -1 
./2.Input/LA50-3-CO_1_paired.fastq -2 ./2.Input/LA50-3-CO_2_paired.fastq 
(ERR): hisat2-align exited with value 1

메모리 부족문제라고 하는데, 정말 메모리 문제가 맞는지 궁금합니다.

아니면, 버추얼박스에서 돌렸기 때문인지요?

질문을 정리해보겠습니다.

1. 가상머신을 사용했기 때문인가요? 아니면, 가상머신 사용 여부와 관계없이 메모리 부족 문제인가요?

2. 메모리 부족 문제라 가정하고, 새 PC를 구입해야 한다면 어느 정도 사양이면 될까요?(완제품 우선 추천 부탁드립니다. 업체로부터 트리밍 되지 않은 raw data fastq파일을 제공받아, 분석을 시작해보려 합니다)

 

시간 할애해주셔서 감사합니다.

#rna-seq
 
#HISAT2
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리실험은안될때가더많아  |  01.26 17:59  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
우선 버전문제부터 해결해야할것 같습니다.
그런데 왜 VM에서 돌리실까요 윈도우시면 WSL2도 방법이긴합니다.
VM에 할당된 램부족일 수도 있겠군요.
제가 주로 사용하는 STAR는 human 기준 30GB정도 램을 요구합니다.
RNA-seq을 위해서만 align 및 qunatify를 진행하시려면 굳이 alinger-> count 과정을 안하시고 salmon, kalisto를 통한 quasi-alignment, pseudoalignment 로 qunatify하셔도 충분히 좋은 결과를 얻으실 수 있습니다.
Salmon과 kalisto는 computing power나 시간적인 측면에서 빠르다는 STAR에 비해서도 훨씬 효율적으로 빠르게 결과를 얻으실 수 있습니다.
기존 갖고계신 컴퓨팅 자원으로 여러 파이프라인 돌려보고 부족하다 싶을때 컴퓨터를 사심을 추천드려요 또한 galaxy라는 클라우드기반 서비스도 있으니 고려해보세요
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