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 전체 > Immunology > Antibody
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질문 WB 항체 제작 관련해서 질문드립니다
알몽유병(대학원생)  | 01.31 09:24

안녕하세요

 

WB을 통해서 특정 protein의 발현을 확인하려고 실험중인 대학원생입니다

 

시판중인 WB용 antibody를 이용해서 WB을 진행하니 결과가 제대로 나오지 않아서 antibody를 제작해서 진행해보려고 생각중입니다

(기존 논문들에서는 이 protein을 WB으로 발현확인하는 경우가 거의 없더라구요)

 

이와 관련해서 검색을 좀 해보니, 잘된다는 분들도 있고, 안된다고하시는 분들도 있어서, 진행 경험이 있으신 분들께 조언을 얻고자 질문드립니다

 

 

감사합니다!

 

#항체 제작
 
#antibody
 
#western blot
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버그기  |  01.31 09:36   

customizing Ab 서비스 해주는 회사가 국내외적으로 많아진 것 같긴 한데 저는 개인적으로 해외업체랑 소통이 좀 답답해서 국내 업체 이용해 본 경험이 있습니다.

크지 않은 회사였는데 제작과정 중간에 항체 후보군으로 WB test를 해줘서 실제로 WB이 되는 항체를 get 할 수 있더군요.

Exprssion  |  01.31 17:36   

어떤 origin의 protein인지 알수는 없으나.. WB 확인해보실 사항.

1. house keeping gene의 bend은 잘나오는지.(가장 빠르게 확인해볼수 있는 사항이며 - HK gene만 발현되고 target만 안나오는 상황이라면 antibody setting을 농도별로로 다시 잡아 보셔야 할 수도 있고, 발현의 시점이 cell 이나 cell condition에 따라 다르기 때문에 pretein 수준에서 케치하기 어려울 수도 있습니다)  

2. Target gene의 expression level을 mRNA level에서 확인 되었는지. ( 위의 상황에서 확인이 안될때  protein을 확인한다면 한번쯤은 확인해 보면 좋은 사항입니다.(논문에 들어가지 않더라도 characterization을 위해서 확인하면 좋음) 

3. gel EP를 걸때 crude pretein 정량값은 일정한지. (간혹 농도에대한 개념이 모호하여 gel에 protein은 엄청 dilution 해서 loading해두고 안보인다고 착각하는 경우가 있습니다.)

3번은 아닐꺼라 생각이 들지만..  많은 공이 필요해 보입니다. 화이팅

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