(1) 이미 4% PFA로 fixation이 끝난 조직인데 acetone으로 또 fixation 할 이유가 있을까요? PBS washing은 염색들어갈 때 해야지 deep freezer에 보관하기전 washing할 이유가 없습니다. 

(2) 역시 4% PFA로 다시 고정할 필요가 없습니다. 

(3) 60도 dryoven으로 baking하는건 보통 파라핀블럭에서 만든 섹션에서 파라핀 제거를 용이하게 할 목적으로 하는걸로 알고있습니다. frozen section에서 권장한다는 건 못봤습니다. 

section하면서 바로 슬라이드에 붙이시는거면 RT에서 30분 이상 dry시켜서 OCT가 말라 슬라이드에 밀착되도록 한 뒤, 슬라이드 박스에 넣어서 -20도나 -80도에 보관하시면 됩니다.

floating으로 section하신거면 cryopreservation solution에 담궈서 -20도나 -80도 보관하시면 되구요. 

24um를 바로 슬라이드에 붙여 염색하기엔 두께가 좀 두껍지않나 싶은데 저는 해보지않아서 모르겠네요. floating으로 할 경우 30-40um정도 두께로 section합니다. 

보관했던 슬라이드를 염색에 쓰려면 RT로 안정화시킨 뒤 washing하고 바로 염색 진행하면 됩니다. 펜 그리실거면 워싱 전에 그리시면 되구요.

베이킹은 저도 처음들어보네요. 파라핀할때는 쓰긴합니다만...

답변 너무 감사합니다 ㅠㅠ

다시 찾아보니 dry oven은 파라핀 블럭에서 사용하는 방법이 맞다고 하네요!

그럼 section 후 RT에서 30분 정도 dry 후,

빛 차단이 가능한 케이스에 넣어서 -80'c에 보관하는 것으로 이해하면 될까요?