실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Purification/Isolation
Maxi prep yield가 낮은 이유를 잘 모르겠습니다...
레벨1 푸이잉 (대학생)
안녕하세요. 인턴으로 일하고 있는 대학생입니다.
이번에 두 종류의 Plasmid를 Maxi prep 하게 되었는데요. 하나는 1800ng/ul에 purity는 1.91로 잘 나왔지만
다른 plasmid는 315ng/ul에 purity는 1.90, 260/230은 2.15로 결과가 심하게 차이가 났고,
이번에 다시 문제의 Plasmid들만 다시 2번의 maxi를 더 했으나 둘 다 purity는 1.90에 300ng/ul 언저리로 나와 질문드리고 싶어 작성하게 되었습니다..
실험의 경우, protocol 진행에 있어 1800ng/ul과 300ng/ul 두 pL의 다른 점은 없었습니다.
16시간 배양 후, 첫 centri에서의 pellet은 1800ng/ul의 pL이나 문제의 pL이나 모두 같은 양이 추출되었으나, 마지막 TE로 녹이기 전 Centri에서의 pellep 양은 확연한 차이가 발생하였습니다.
특히나, 개인적으로 궁금한 점은 흡광도에서 A260과 A280값이
1800ng/ul = 37, 19
300ug/ul = 6.3, 3.3
이렇게 나오는데, 이 경우 DNA의 양 뿐만이 아니라 Protein의 양도 적게 나왔으니, pL이 transfection 된 양이 적은 것이 아니라 protocol 진행에 미스가 났다고 봐도 되는걸까요..!
또한, pL 종류에 따라 최종 Yield 차이가 많이 날 수도 있는건가요??
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