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BioLab 주재열 교수
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 전체 > Molecular Biology-RNA > Purification/Isolation
조회 594  스크랩 인쇄하기 주소복사 트위터 공유 페이스북 공유 
질문 Trizol을 이용하여 RNA 추출 시 260/230 이 낮은 문제 해결 아이디어 구합니다.
올챙이미르-(과기인)  | 02.07 15:53
첨부파일 파일첨부: image-3.png (15 KB)
이미지 첨부파일
안녕하세요.
모양이 조금씩 다르긴 한데 230에 피크가 계속 잡힙니다.
뿌리 500ug에 trizol 10ml를 시작으로 15ml 튜브를 이용해서 뽑았습니다. 업체 메뉴얼을 그대로 따라서 클로로포름, 이소프로판올, DEPC tretead 70% EtOH를 썼어요.
상층액을 딸때도 아까울정도로 욕심 안냈고, 알코올 제거도 피펫을 이용해 최대한 제거했습니다.
다시 이소프로판올 넣고 클린업하면(이때는 이튜브 사용) 수치가 좋아지긴 하는데, 조금 분해되는 것 같아서요. 최대한 과정을 줄여보려고합니다.
클로로포름 처리를 두 번 하는 건 결과가 개선되긴 하는데 원하는 만큼 개선되지는 않았습니다.
혹시 원심분리 속도가 문제일 수도 있을까요? 15ml 튜브에 넣어 원심분리할 수 있는 원심분리기를 사용하다보니 속도가 권장속도에는 못미쳤거든요.

좋은 아이디어 있으실까요?
#RNA
 
#trizol
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
올챙이카리스마정  |  02.07 16:33  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
Pellet 이 투명해져서 눈에 안보일때 까지 말리시고 DW로 resuspend해보세요 경우에따라선 10분이상 말려야할때도 있더군요
asdf  |  02.07 16:34   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

EtOH 제거할때 pellet 손상안갈정도로만 피펫으로 제거해주시고

cleanbench에서 air dry를 오랫동안 (overnight) 해서 잔류용액을 전부 날려보세요.

올챙이미르-  |  02.08 01:15  
펠렛 양이 많아서 충분히 말렸다 생각해도 덜 말랐었나봅니다. 침전을 소량으로 나눠서 시도해봐야겠습니다. 감사합니다.
올챙이미르-  |  02.15 10:04  
첨부파일 파일첨부: 20230215_101043.jpg (623 KB)
이미지 첨부파일
프로판올 침전 부터 10개로 나눠서 진행했더니 결과가 많이 좋아졌습니다. 펠렛 크기가 큰 게 문제가 맞았나봅니다. 이제 어떻게 더 개선해야할지는 다른 문제인 것 같습니다. 감사합니다.
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