실험 Q&A Mol. Biol.-DNA > Gene Cloning
유산균 electroporation 방법 점검 부탁드립니다.
레벨2 PORI (일반인)
석사과정 대학원생입니다.
E. coli ->Bacillus에 클로닝 했고, 해당 inset vector를 유산균에 electroporation하고 있는데, 몇달 째 애를 먹고 있습니다.
실험조건에 대해 점검 혹은 개선할 점을 여쭙고 싶습니다.
1) 균주: L. lactics MG1363
- OD600값: 0.5~0.8, wasing 1~3번까지 각각 실험
2) Washing 용액: 3가지 종류로 각각 실험
0.5M sucrose (or) 0.5M sucrose+ 10% glycerol (or) 10% glycerol
3) 배지: MRS + antibiotic maker -> 30℃ incubator
4) com cell 100ul 씩 분주하여 deep freezer
5) com cell 100ul + vector DNA 1~2ul(600ng/ml)
6) 0.2cm 큐벳사용
- 1.5kv (or) 1.8kv (or) 2.0kv (or) 2.5kv 각각 실험
com cell효율 높이려고 많이 노력하고 있는데 Bacillus에는 클로닝이 되는데유산균은 죽어도 안되는 것이...어떤 부분이 문제인지 보이신다면 조언 부탁드립니다.
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