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저는 처음 PCR 배울 때 10p나 5p로 희석해서 20ul reaction 기준 1ul의 primer를 첨가하면 된다고 배워서 쭉 그렇게 하고 있습니다.
forward, reverse를 각각 dilution 해서 쓰기도 하고 편의를 위해서 forward, reverse를 한꺼번에 섞어 놓기도 하지요.
질문자분처럼 논문을 찾아서 계산할 생각은 아예 안해서 댓글달기가 조심스러웠지만 다른 분들이 답변을 안해 주셔서 달아 봅니다.
어쨋든 분명한 건 primer working solution을 질문자 말대로 1/50희석 하면 2p밖에 안되기 때문에 너무 낮다는 거예요. 그걸 또 0.05ul만 넣겠다고 하시니 우려스럽네요.. ;;;
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레벨1
vivien1945
(일반인)
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23.03.08 09:14
제가 본 논문에서 본 최종농도 0.2uM가 0.05ul 넣는거였는데
다른선배분이 그렇게 넣는다고 해서 아무리생각해도 이해가 안되서 질문드린거였는데 논문과 별개로 비율맞춰서 해보셨다고 하네요. 답답해서 직접물어봤어요 ^^;;
정확히 정리가 됐습니다. 답변 감사드립니다.
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레벨5
실험은안될때가더많아
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23.03.08 11:58
- primer 100pmol (합성하면) 짜리에서 2ul따서 + TE98 =100ul 만들고
이부분에서 한번 농도가 바뀌네요
이때 1/50 dilution을 진행했기때문에 primer는 2pmole/ul입니다.
25ul reation기준으로 이 primer는 2.5ul을 넣어줘야 0.2uM (0.2pmole/ul)입니다.
위처럼 계산할 시 10pmole primer를 만들어두면 50ul reaction 기준 1ul 넣었을 때 0.2uM이 됩니다.