실험 Q&A Mol. Biol.-RNA > mRNA Analysis
mRNA로부터 합성한 cDNA를 다시 template으로 해서 cDNA 합성해도 되나요?
레벨2 크리스12 (대학원생)
안녕하세요 항상 도움 주셔서 감사드립니다.
요즘 RT-qPCR 실험을 계속 수행하고 있습니다.
mammalian cell에서 RNA를 추출한 후, oligo dT primer 사용하여 cDNA로 합성하구요 (약 800ng/μL의 농도로 20μL 얻음)
그렇게 얻은 cDNA를 template으로 qPCR 수행합니다. (튜브당 0.5μg 사용)
그런데,, qPCR 장비에 문제가 생겨서 여러 번 샘플을 날렸습니다ㅠ
중요한 샘플인데 얼마 남지 않아서,, 혹시 이걸 template으로 다시 cDNA를 합성해도 타당할지 궁금해졌습니다.
현재 남아있는 cDNA 안에는 Gapdh 도 있고 기타 여러 interested gene들의 cDNA가 일정 비율로 혼재되어있을텐데요
이걸 template으로 다시 cDNA로 합성하면, 그 안에 있던 여러 종류의 cDNA들이 거의 동일한 비율로 증폭되지 않을까요??
Cell 다시 키워서 RNA 다시 뽑으면 되긴 하는데,, 귀찮음 보다는 material 을 아끼기 위함이 큽니다 ㅠ.. cell culture 할 때 사용하는 cytokine이 많이 고가여서요..
조언 부탁드립니다. 미리 감사드립니다!!
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