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competent cell 제조
레벨1 dhehfl (대학생)
구입한 competent cell를 불려서 stock를 만들고 싶은데, 불려서 stock 제조 방법을 아래와 같이 하면 될까요?
1. LB broth배지(without Antibiotic) 5ml에 구입한 competent cell 접종 하여 O/N 배양
2. 밤새 배양한 배양액 1/100 부피로 100ml LB broth 배지를 접종하고, OD600 = 0.5 - 0.6으로 될 때 까지 배양.
3. 세포를 멸균된 50ml falcon 튜브 2개에 옮기고 얼음 위에서 20분 동안 배양.
4. 4500 rpm 및 4°C(미리 냉각 원심분리기)에서 5분 동안 원심분리기를 하고 상층액을 폐기
5. 차가운 100mM CaCl2 20ml에 각 펠릿을 조심스럽게 현탁하고 얼음 위에서 1시간 동안 배양
6. 4500 rpm 및 4°C (미리 냉각 원심분리기)에서 5분 동안 원심분리기를 하고 상층액 폐기.
7. 차가운 15% 글리세롤이 함유된 85mM CaCl2 2ml을 얼음에 두고 펠릿을 조심스럽게 현탁 한다.
8. 50 - 200µl를 넣고 -80°C에서 보관.
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