실험 Q&A Chemical biology > Extraction/Concentration
별불가사리 단백질 추출에서의 문제점
레벨2 jeansflow (대학원생)
안녕하세요 선배님들. 별불가사리 단백질 추출에 관해서 궁금한 점이 있어 이렇게 연락을 드립니다.
다름이 아니라 논문에서 찾은 별불가사리 단백질 추출법인데 40% ammonium sulfate와 Tris-HCl buffer (pH 7.4)를 첨가하라고 되었지만 명확한 첨가량과 Tris-HCl buffer의 농도가 나와있지 않습니다.
냉동된 별불가사리를 작은 조각으로 자른다.
잘게 자른 별불가사리를 4℃의 3차 증류수에 넣고 균질화.
균질화 한 별불가사리를 10000*g에서 30분간 원심분리.
원심분리 후 상층액(S1)에 40% ammonium sulfate를 상층액(S1)에 첨가.
40% ammonium sulfate를 첨가한 상층액(S1)을 원심분리 후 상층액(S2) 획득.
획득한 상층액(S2)에 50mM Tris-HCL buffer (pH 7.4)를 첨가
여기서 궁금한 점은 단백질 추출을 위해서 40% ammonium sulfate를 어느정도 넣는지와 어느정도의 농도인 Tris-HCl buffer (pH 7.4)를 어느정도 넣는지가 궁금하여 이렇게 질문드립니다.
또한 궁금한 점은 제가 별불가사리 단백질 추출법 이기에 다른 단백질 추출법의 논문에 대해서는 참고하지 않았는데 별불가사리가 아닌 다른 생물의 단백질 추출법에 대한 논문을 참고해도 될까요?
부족하지만 긴 글 읽어주셔서 정말 감사드리며 오늘도 좋은 하루 되시길 바랍니다!
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