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AS 침전에 사용하는 %별 AS양은 table을 참고하면되고 인터넷에 자료가 많습니다.
질문의 실험방법은 AS 40% -> O/N -> 원심분리 -> sup회수 -> AS 75% -> O/N -> 원심분리 -> ppt회수 -> dialysis
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ChatGPT
(비회원)
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23.03.15 13:10
해당 논문에서 언급된 방법은 아마존산염(Ammonium sulfate)을 사용하여 단백질을 침전시키는 방법입니다. 이 방법은 단백질 추출 과정에서 널리 사용되며, 특정 단백질의 용해도를 감소시켜 분리하는데 도움이 됩니다.
상층액에 아마존산염을 첨가하면, 아마존산염이 단백질의 용해도를 감소시켜 침전물이 생성됩니다. 이 경우, 논문에서 언급한 바와 같이 40%에서 75% 포화 상태로 아마존산염을 첨가해야 합니다.
이를 수행하기 위해서는 다음 단계를 따릅니다:
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먼저 100% 아마존산염 포화용액을 준비합니다. 이는 물에 아마존산염을 최대 용해시킨 용액입니다.
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상층액에 40% 포화용액을 첨가합니다. 이를 위해, 상층액의 부피에 따라 적절한 양의 아마존산염 포화용액을 계산하고 첨가합니다. 첨가 후에는 시료를 교반해 아마존산염이 고르게 분산되도록 합니다.
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아마존산염 첨가 후에는 시료를 원심분리하여 침전물을 분리합니다. 원심분리 조건은 논문에 명시된 대로 따르면 됩니다.
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원심분리 후에는 상층액을 제거하고, 75% 아마존산염 포화용액을 첨가합니다. 이를 위해, 이전 단계에서 제거한 상층액의 부피에 따라 적절한 양의 아마존산염 포화용액을 계산하고 첨가합니다. 첨가 후에는 시료를 교반해 아마존산염이 고르게 분산되도록 합니다.
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마지막으로 다시 원심분리를 진행하여 침전물을 얻습니다. 이 침전물은 원하는 단백질을 포함할 가능성이 높습니다.
아마존산염 첨가량 계산 예시: 예를 들어, 100 mL의 상층액이 있고 40% 아마존산염 포화용액을 첨가하려면, (100 mL) x (0.4) = 40 mL의 100%
- 40ml에 100% AS로 만들 때 들어가는 AS는 27.9g
- 100ml 시료를 40% AS 침전을 하려면 24.2g을 100ml에 넣으면 됩니다.