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FACS 처음 실험합니다,,, 도와주세요
레벨1 밤퇼 (대학원생)
안녕하세요 DNCB로 BALB/c 아토피를 만들어서 spleen에서 Th1/2 확인하려 합니다. 완전 처음이고 랩에 세팅하는거라 도움이 절실합니다
1. 제가 구입하려는 antibody가 아래 4가지입니다. 다 mouse detection antibody예요
CD3-FITC (Rat, IgG2bk), CD4-APC-eFluor780 (Rat, IgG2bk)
IL-4-PE (Rat, IgG1k), IFN-r-APC (Rat, IgG1k)
4분면(?) 나눌때 control isotype이 필요하다고 하는데 그럼 저는 IgG2bk-FITC, IgG2bk-APC-eFluor780, IgG1k-PE, IgG1k-APC 이렇게 4가지를 다 Rat으로 구입해야 하는건가요??
2. spleen에서 세포를 꺼내서 10% FBS/RPMI1640에서 PMA, Ionomycin으로 자극할건데 옆방 박사님이 10%면 너무 높다고 사이토카인이랑 이것저것 많아서 FBS를 줄이라고 하시는데 이해가 잘 안 갑니다,,, 그리고 DNase를 넣으면 좋을 것 같다고 하시는데 왜 넣어주는 걸까요,,??
3. FACS buffer는 FBS 2%, NaN3 0.1% in DPBS 사용하려고 하는데 사용해도 되는 농도인가여??
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