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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 western blot 실험 조건 설정 방법이 궁금합니다.
개구리hazzy(대학원생)  | 03.21 14:51

안녕하세요

western blot을 할 때 몇 % gel을 쓸지와 하나의 well 당 몇 ug/ul의 protein을 넣을지

는 어떻게 설정하는건가요?

현재 보고자 하는 항체의 사이즈가 37, 72, 151 kDa이고

가지고 있는 단백질 총 volume이 30~50ul 정도인데

단백질의 농도는 1~5 ug/ul 정도로 낮아서 몇을 넣어야할지 고민입니다.. 

#western blot
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
개구리실험조아  |  03.21 15:02  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.
첨부파일 파일첨부: SDS-page gel.png (70 KB)
이미지 첨부파일

단백질 양은 발현이 잘 되는지 안되는지에 따라 조절하셔야 할 거에요.

해당 단백질 관련 논문을 참고하시는게 좋을 듯 싶습니다.

셀렉바이오  |  03.22 13:29   
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

안녕하세요 셀렉바이오 학술지원 담당자입니다.

western blot은 보시고자 하는 단백질에 따라 넣어야 하는 양이 천차만별인데요. 보통은 10 ug 에서 100 ug까지 다양하게 넣고, gel에 따라 다르지만 각 well의 최대 volume이 보통 30-50 ul 이기 때문에 정량 후 최대한 높은 농도로 sampling을 하시는것이 좋습니다.

넣으시기 편하려면 가장 낮은 농도에 맞춰서 1 ug/ul로 샘플링 하실 경우 30 ul loading 시 30 ug은 넣으실 수 있겠습니다. 그 정도 농도면 보기 힘든 단백질이 아닌 일반적 단백질의 경우 충분히 확인하실수 있으실 겁니다.

혹은 10 ug씩 해보고 경향부터 확인 후 나머지 20 ug을 loading하는것도 방법입니다. 

또한 사이즈가 다르면 37, 72 kDa 1장, 151을 보기 위해 1장 하여 두장을 하시는것이 좋으나 단백질이 부족할 경우 8~12%로 맞춰서 내리고 3장으로 자르거나 stripping하는 방법도 있습니다.

western blot에 필요한 시약, stripping buffer, gel 구성 요소 모두 취급하니 언제든 order@selecbio.com 혹은 010-6811-5984로 연락주세요.

감사합니다.

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