Decreases in tubulin and actin gene expression prior to morphological differentiation of 3T3 Adipocytes - ScienceDirect

다른 housekeeping 단백질로 보시죠

혹시 sampling 어떻게 하시나요?

RIPA나 다른 lysis buffer로 걷고 centrifuge 로 debris, lipid layer 제거하고 하시는가요

저는 지방세포에서 단순히 발현 잘 되는 단백질 western 할 경우에는

sample buffer를 1.5X로 만들어서 바로 cell lysis하고 10분 boiling 할 경우에 밴드가 이쁘게 잘 나왔습니다.

running 하실때도 초반엔 낮은 속도로 20-30min 정도 running 하고 속도 높여보세요.

저도 3T3-L1 지방분화로 실험을 예전에 다뤘는데

분화되면 lipid droplet 때문에 세포질 구획이 줄어들어서

단백질 얻기가 좀 어려울수도있어요

n수를 늘려서 하나로 합친 후 샘플링하던가...

BCA 정량할 때 1/2 ~ 1/5 배만 희석해서 측정한 다음 나온 값에

다시 Dilution facotr 곱해주세요 (물론 BCA assay STD곡선 안에 들어가는 범위로 희석)

저는 12well plate 로 실험했고

한 group 당 2well 씩 모아서 샘플링했던 기억이 나네요