바로 아래 TGF-b 녹이는 방법 및 농도에 대해 질문하신 것을 보았습니다.

혹시 vehicle 군은 어떠한 양상을 나타냈나요?

reconstitute는 HCl에서 하게 되어있던데 이후 dilution은 어떻게 진행했는지, reconstitute한 그대로 사용했는지 등등에 따라 buffer의 농도가 다를 수 있습니다.

따라서 vehicle 군에서의 결과가 처리 전 group과의 어떠한 변화가 있었는지 알아야 할 것 같습니다.

1. 4mM HCL 0.1% BSA 버퍼를 만들었어요
2. 제가 가지고 있는 스탁이 5ug이라 1번 버퍼 5ml을 녹였습니다.

그럼 1ug/ml이 되었습니다.
논문에 10ng/ml로 치라고 되어있어 2ml 기준 20ul를 쳤구요...

저는 60mM dish에 lx2 cell 4x10^5깔고 TGf-B 10ng/ml 24h 합니다...

그래서 오늘 큐피시알 결과를 봤더니.. timp1은 유도가 안되었고 나머지도 뭐... 2~3배인데 이것도 겨우 띄웠습니다..ㅠㅠ (fibronectin, a-sma, col1a1) tgf-b는 1.4배..? 유도라고 말하기도 ...어렵네용...

 

 

1. Reconstitute는 100ug/ml 로 하라 되어있다하셨는데 지금처럼 하신거면 reconstitute를 10ug/ml에 하신게 됩니다. 100ug/ml로 reconstitute 하신 뒤에 다른 보관용 버퍼에 희석해야합니다.
또한 vehicle(TGFb 안 녹인 버퍼 같은 농도 같은 volumn) 처리군과의 비교를 하셨는지 여쭈어 보는겁니다

헉.... 먼저 100ug/ml로 했었어야 했군요....저는 뭣도모르고 바로 희석할라고 ...ㅠㅠ 넣어버렸네요...

희석 버퍼는 따로 나와있지 않았는데 media에 희석해도 상관없는건가요?

그리고 vehicle 처리군은 하지않았습니다...

그리고 또 여쭤볼게 5ug을 100ug/ml로 재구성해야하면 20ul의 용액에 녹여야하는건가요..? 제가 아직..부족한게 많아서 헷갈리네요 ㅠㅠ

지난 번 질문에 제가 답해드렸네요.

그 때 질문자분께서 stock을 100ug/ml로 만들라고 되어있지만

1/100 (1000ng/ml)로 만들어서

10ng/ml로 처리하실 경우, 1/100로 희석해서 처리하면 되느냐고 물으셨습니다.

계산상으로 최종 농도는 같아서 제가 그렇다고 말씀드렸는데 stock 농도를 변경하면 안되는 거였나보죠? 그렇다면 제가 크게 실수 했습니다.

5ug을 50ul에 녹여야 100ug/ml이 됩니다.

그렇다면 처리할 때 10000배 희석하셔야 합니다.

 

 

아.. stock농도는 변하게 하면 안되는군요... 여기에서 한번 더 알아갑니다..

저는 나중에 희석하게 편리하게 stock 농도를 아예 희석시켜서 쳤네요....
다시 녹여서 해보도록 하겟씁니다 감사드려요 ㅠㅠㅠㅠ

 이 경우에 stock 농도를 실험자 편의에 맞게 변경하면 안되는 이유가 무엇인지 실험은안될때가더많아님이 설명해 주시면 감사하겠습니다.

저도 궁금합니다~

reconstitute할때만 표기 농도로 reconstitute하란 말이었습니다.

그 후엔 사용하시기 편한 농도로 dilution하여 중간농도의 stock을 만드셔도 좋습니다.

특정사 제품의 경우 어떤 buffer에 dilution할지도 적혀있습니다만 TGFb와 같은 경우 그대로 HCl + 0.1% BSA에 중간 농도의 stock을 만드시면 될것 같습니다.

하지만 이보다 더 중요한 것은 만들어 두신 4mM HCl+ 0.1% BSA 를 vehicle로 삼아 이를 처리한 group과 4mM HCl+ 0.1% BSA 에 녹여진 TGFb 처리 group을 비교해보시는게 더 중요합니다.

Vehicle 대조군이 아무 것도 처리한 대조군보다 더 정확한 대조군이며 이를 기준으로 gene expression을 확인해야지 정확한 처리물질의 효과를 알 수 있습니다.

우와...다들 정말 감사합니다ㅠㅠㅠ정말 감사드려요ㅠㅠㅠ