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BioLab 김한준 교수
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 전체 > Molecular Biology-Protein > Western Blot Analysis
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질문 gel %가 안 맞습니다...ㅠ, running gel 만들 때 가끔씩 발생하는 문제점
알가랑비처럼(대학생)  | 03.28 22:35

자대에서 인턴 중인 학부생입니다

1. 아크릴아마이드젤 만들고 sds-page하고 transfer하고 blocking하려할 때 membrane에 옮겨진 걸 보면 거의 1/2 확률로 %가 잘 맞지 않습니다

분명히 7.5%를 만들면 7%로 만들어졌는지 제가 관찰하고자하는 36kda 마커가 보이지 않고 12%를 만들면 10%로 만들어졌는지 50kda이 보이지 않아서 재실험을 해야할 때가 많습니다 

만들 때 pipette aid로 만들고 오차가 날까 싶어서 10ml로 안하고 5ml로 만드는데 만들 때마다 그러니 참... 눈치가 보입니다 troubleshooting 어떻게 해야할까요?

 

2. 이 부분은 정말 가끔 발생하는데 running gel을 만들고 isopropanol로 산화되는 것을 막는데 잘 굳었나 확인하면 왼쪽 혹은 오른쪽(거의 왼쪽에서 발생) side에서 gel이 녹은 듯이 한 쪽 부분이 내려가있더라구요 
 

gel 만들고 tube에 냅뒀다가 굳은지 확인하면 뿌옇게 되는 것처럼 glass에도 뿌옇게 되어있고 왼쪽 부분이 녹은 것처럼 되어있고 isopropanol도 샜는지 날라간 것 같아보이더라구요

 

처음에는 isopropanol이 문제인가? 해서 새걸로 했는데도 그랬고 다른 gel 만드는 solution이 오래돼서 그런가? 해서 그것 또한 새로 바꾸고 만들었는데도 가끔씩 발생하더라구요 이런 경우는 무슨 경우일까요? ㅠㅠ

 

#Westernblot
 
#Acrylamide gel
 
#gel trouble shooting
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답변 본 정보는 네티즌에 의해 작성된 정보로, 내용 중 중요하다고 생각되는 부분은 추가적인 사실 확인을 반드시 하시길 바랍니다.
대왕개구리강시  |  03.29 09:07  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

SDS-PAGE 만들때 side에서 gel이 녹은 듯이 한 쪽 부분이 내려가있는 것은 젤이 조금 새는 경우에 해당합니다.

젤판을 세팅한 후 아크릴아마이드 젤을 붓기전에 agarose gel을 녹여서 바닥에 조금 부어주면 젤판 아래쪽이 막히기 때문에 그 후에 아크릴아마읻드 젤을 부어도 세지 않습니다.

개구리실험조아  |  03.29 10:48  
채택답변: 질문자가 채택한 답변입니다.

gel이 새는 문제라면 저는 조립한 유리 아랫부분에 만병통치약?인 바세린을 발라 줍니다. 좀 원시적일지 모르지만 간편하면서도 나름 효과적입니다.

개구리차몬드  |  03.31 11:11  

1. gel 만들 때 덜 섞였거나 계산이 잘못되지 않았을까 싶어요

사용하는 acrylamide의 농도, 넣어주는 양의 계산 등을 확인해보세요

2. gel이 새서 그럴 수도 있을 것 같아요 그래서 저희는 확인 차 유리틈에 dw를 부어두고 gel을 만드는데, 그러면 gel을 만드는 동안 물이 새는지를 확인할 수 있습니다

Min  |  04.01 00:38   

Acrylamide와 Bis-acrylamide를 29:1 30% or 40%로 직접 만들어 쓰시는지, 아니면 구입해서 쓰시는지를 먼저 여쭤보고 싶네요. 직접 제조해 쓰신다면, 이 때문일 가능성도 큽니다. 

업체에서 판매하는 것을 쓰신다면, 제대로 SDS-page의 %를 맞추셨는지 다시 한번 점검해보세요! Google 에 검색하면 정말 많은 SDS-page 조성이 적혀있는 table을 볼 수 있답니다.

 

 

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