- 추출 방법이 좀더 자세히 알려주세요.

- DNase 처리를 어떻게 했나요?

아 RNA 추출방법은 아래와 같습니다. 

1. Pellet : Bacteria(E.coli) culture broth 5ml 

2. Pellet +TE buffer(Tris 20mM, 2mM EDTA) + lysozyme 20ul + RNase inhibitor(1U/ul, Biolabs), incubation (37도 30분)

3. Cell lysis solution(이게 조성을 모릅니다, 박사님이 그냥 이걸로 하라고 하셨고 방에서 fungus RNA prep할 때 사용합니다) 600ul + Proteinase K 20ul 

Incubaton 50도에서 30분했는데 투명해지지 않아서 65도에서 30분 추가

4. MPC protein precipitation reagent 400ul 추가해서 mix

5. Add phenol-chloroform (1:1 비율로), incubate 2~3min. Centrifuge at 12000g for 15min, 4°C.

6. Transfer the aqueous phase to a new tube.

7. Add Chloroform (동량) incubate 2~3min. Centrifuge at 12000g for 15min, 4°C.

8. Transfer the aqueous phase to a new tube.

9. 100% ethanol (2X, 차갑게). Incubate for 10 min on ice, centrifuge for 10 min at 12000g at 4°C. 

10. Add 70% Ethanol 1ml, vortex, centrifuge at 7500g for 10min, 4도.

11. RNA pellet air dry 5~10분 

13. gDNA 제거 : 10X Dnase buffer + D.W + Dnase I 넣고 37도에서 10분

14. RNA clean-up : Biolabs mornach RNA cleanup kit 사용